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閱讀：201發(fā)布時間：2020-8-11
一、慢病毒
逆轉(zhuǎn)錄病毒（Retrovirus）：是一種RNA病毒，在復(fù)制時需在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下首先將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)?span style="font-family:calibri">cDNA， 再在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯等蛋白酶作用下擴(kuò)增。主要包括RNA腫瘤病毒、慢病毒及泡沫病毒等三種亞科。
慢病毒（Lentivirus）：屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，名稱源自該種病毒長達(dá)數(shù)年的潛伏期。
經(jīng)典的慢病毒是由HIV病毒改造而來，而且HIV-1/HIV-2系統(tǒng)也得到了廣泛的應(yīng)用，除了HIV病毒系統(tǒng)以外，后續(xù)還有猿類免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus, SIV）載體系統(tǒng)、貓免疫缺陷病毒（felines immunodeficiency virus, FIV）載體系統(tǒng)、綿羊梅迪-維斯納病毒（MMV）載體系統(tǒng)和馬傳染性貧血(EIA）載體系統(tǒng)等。
慢病毒結(jié)構(gòu)：
2個調(diào)節(jié)基因：
（1）tat基因：反式激活因子，對HIV基因起正調(diào)控作用。
（2）rev基因：病毒蛋白表達(dá)調(diào)節(jié)因子，增加gag和env基因?qū)Y(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)。
4個輔助蛋白（附屬）基因：
（1）vif和vpu調(diào)節(jié)感染性病毒顆粒的產(chǎn)生；
（2）vpr和nef參與疾病的表現(xiàn)。
慢病毒的優(yōu)勢：
1.慢病毒攜帶的基因組可整合到宿主基因組，使宿主細(xì)胞長時間穩(wěn)定表達(dá)外源基因；
2.可感染分裂和非分裂細(xì)胞；
3.低免疫原性，直接注射活體組織不易造成免疫反應(yīng)，適用于動物實驗；
4.可以更換特異性啟動子；
5.野生型的HIV大小約為9.8 kb，插入片段可長達(dá)5-6 kb；
二、慢病毒載體
慢病毒載體（Lentivirus）是一類改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒載體，是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，基因組是RNA，其毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒?？衫媚孓D(zhuǎn)錄酶將外源基因整合到基因組中實現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)，具有感染分裂期與非分裂期細(xì)胞的特性。
慢病毒包裝過程：
慢病毒基因組進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞漿中反轉(zhuǎn)錄為DNA，形成DNA整合前復(fù)合體，進(jìn)入細(xì)胞核后，DNA整合到細(xì)胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄成mRNA，回到細(xì)胞漿中，表達(dá)目的蛋白；或產(chǎn)生小RNA。慢病毒介導(dǎo)的基因表達(dá)或小RNA干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定，并隨細(xì)胞基因組的分裂而分裂。
慢病毒包裝和侵染細(xì)胞的過程（元和生物）
三、慢病毒的使用和優(yōu)勢
慢病毒的使用量的取決因素：滴度， 感染體積 ，MOI ，細(xì)胞密度
滴度（Titer）：單位體積液體中有感染能力的病毒或噬菌體數(shù)目。單位：TU/mL （活性滴度單位）、copies/mL （物理滴度單位）
檢測方法：定量PCR檢測干擾后細(xì)胞基因組中外源DNA拷貝數(shù)。
實驗原理：慢病毒介導(dǎo)外源基因以逆轉(zhuǎn)錄方式整合進(jìn)目的細(xì)胞基因組。
MOI（multiplicity of infection）：感染復(fù)數(shù)或者復(fù)感染指數(shù)。指感染時病毒和細(xì)胞數(shù)量的比值。在實驗中也將某個細(xì)胞達(dá)到 80%感染時所需的MOI 值定義為這個細(xì)胞的MOI值。加的病毒量(μl)=細(xì)胞數(shù)×MOI/滴度(…/ml) ×1000。
后，818 一些有關(guān)慢病毒方面的產(chǎn)品：
1.關(guān)于慢病毒載體構(gòu)建方面：
ORF表達(dá)克隆產(chǎn)品【LPP-貨號-載體-100，ORF/Promoter/lncRNA慢病毒】
shRNA克隆產(chǎn)品【LPP-貨號-載體-050，shRNA慢病毒】
miRNA克隆產(chǎn)品【LPP-貨號-載體-050，miRNA/inhibitor慢病毒】
Cas 9 和sgRNA克隆產(chǎn)品【LPP-CP-LvC9NU-載體-100，Cas9 慢病毒】
2.慢病毒包裝服務(wù)方面（慢病毒顆粒，病毒濃縮，包裝細(xì)胞系等）
LT001，基于HIV骨架的慢病毒顆粒包裝試劑 (20 reactions)
LT005，基于qRT-PCR技術(shù)的HIV骨架慢病毒顆粒滴度檢測試劑 （20次RT反應(yīng) +50次PCR反應(yīng)）
LT007，慢病毒濃縮試劑盒（50 ml）
LT008，293Ta慢病毒顆粒包裝細(xì)胞系 (1.5 x 106 cells)
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