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鈣離子檢測:探針助力科研!

閱讀:118發(fā)布時間:2020-6-30

離子探針提供了一種將離子通道激活與細胞內離子濃度的后續(xù)變化測定相關的方法。用這些類型的探針測量的離子豐度變化同時也反映了細胞的膜電位的變化,好用的離子探針,可有效地測量離子。

鈣離子檢測

鈣可作為多種細胞中的通用第二信使,Ca 2+調節(jié)所有類型細胞的許多功能,因此鈣測量對于各種生物學研究至關重要。在1980年代,Tsien及其同事生產了各種熒光指示劑。其中Indo-1,F(xiàn)ura-2,F(xiàn)luo-3和Rhod-2是測量Ca 2+濃度的*有價值的染料。近年來,我們陸續(xù)推出了更優(yōu)秀的鈣離子探針:Fluo-8 ®,Cal-520 ® Calbryte™520,這些為實現(xiàn)高通量監(jiān)測鈣濃度,篩選GPCR和鈣離子通道藥物篩選提供了有力的工具。

 

  

熒光單波長鈣指示劑

*常見的可見光激發(fā)的鈣離子探針有Fluo-8 ®,的Fluo-4,F(xiàn)luo- 3,RHOD-2和RHOD-4。Fluo- 8®指示劑廣泛用于流式細胞術,共聚焦激光掃描顯微鏡以及高通量篩選GPCR靶標。FLUO-8 ®是基本上無熒光的,除非與Ca2+結合至,此時量子產率為?0.15以及在飽和Ca2+存在條件下Kd為的390nm。Cal-520®是迄今為止*佳488 nm處激發(fā)綠色熒光鈣離子指示劑,具有顯著改善的信號/背景比和細胞內保留的特征。

長波長的Rhod-4™,Cal-590™和Cal-630™是綠色熒光Fluo-8®Fluo-4和Fluo-3的Ca 2+指示劑,可用于存在高水平的自體熒光的細胞和組織中進行鈣定量。Rhod-5N對Ca 2+的結合親和力低于任何其他基于BAPTA的指示劑(Kd =?320 µM),適用于10 µM至1 mM范圍內的Ca 2+測量。像母體Rhod-2指示劑一樣,Rhod-5N在不存在二價陽離子的情況下基本上是無熒光的,并且在結合Ca 2+時顯示出強的熒光增強,沒有光譜偏移。所有Fluo,Cal和Rhod指示劑均可作為不滲透細胞的鉀鹽或可滲透細胞的AM酯使用。

優(yōu)秀的單波長鈣指示劑

Cal-500 單波長鈣指示劑,貨號:AAT-20412

經典的單波長鈣指示劑

Cal Green 1 單波長鈣指示劑,貨號:AAT-20502

比例離子探針或雙波長離子指示劑是熒光染料的一個子類別,其用于定量測量細胞內離子濃度。與單波長指示器相比,雙波長指示器具有*的光譜特性,這些光譜特性是由于結合其目標離子而觸發(fā)的。在比例鈣指示劑的情況下,當這些染料與游離的Ca 2+結合時,它們的*大吸收和發(fā)射波長都會發(fā)生變化,例如,雙重激發(fā)的Ca2+指示劑在結合或不結合Ca 2+時會顯示不同的兩個*大激發(fā)波長(Em),使用從收集的熒光數(shù)據(jù)得出的比率,研究人員可以準確確定細胞內Ca 2+的濃度。

熒光比值型鈣指示劑

鈣離子熒光探針Quin-2 AM,貨號:AAT-21050

比值型熒光探針進行定量,減少了染料負載導致的指示不均勻,不良的染料保留和光漂白的影響。自1985年Tsien及其合作者引入比例計量指標以來,無數(shù)科學論文都引用了比例指標,這些指標有助于研究鈣在細胞調節(jié)中的作用(Grynkiewicz等人1985)。

水母發(fā)光蛋白復合物由22,000Da的載水母發(fā)光蛋白,分子氧和發(fā)光體腔腸素組成。當三個Ca 2+離子與該絡合物結合時,腔腸素被氧化為腔腸酰胺,并伴隨釋放出二氧化碳和藍光。水母發(fā)光蛋白的生物發(fā)光對Ca 2+濃度的依賴性使得可以在0.1 µM至> 100 µM的檢測范圍內測量Ca 2+濃度。與熒光Ca 2+指示劑不同,檢測Ca 2+結合的水母發(fā)光蛋白,無需照亮樣品,從而消除了自發(fā)熒光的干擾。

發(fā)光鈣檢測:腔腸素及其衍生物

鈣離子熒光探針腔腸素,超級純,貨號:AAT-21156

除了天然腔腸素,我們還提供了一些腔腸素的衍生物,這些衍生物賦予不同的Ca 2+水母發(fā)光蛋白復合物的親和力和光譜性質。據(jù)報道,腔腸素hcp重組載脂蛋白總體上具有*佳的發(fā)光,同時具有高量子產率和快速響應時間。但是,腔腸素類似物在細胞內重建水母發(fā)光蛋白可能相對較慢。含有腔腸素的cp,f或h形式的水母發(fā)光蛋白的發(fā)光強度比用天然腔腸素重構的載脂蛋白的發(fā)光強度強10至20倍,腔腸素 h主要用于GPCR的HTS篩選測定中。

艾美捷科技與國內外優(yōu)秀的生物試劑供應商保持著密切的合作關系,目前已成為眾多的中國總代理或一級代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一時間為用戶提供*前沿的專業(yè)資訊、完備的產品及物流服務。


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