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閱讀：242發(fā)布時間：2020-6-19
蛋白定量即蛋白質(zhì)定量，蛋白質(zhì)定量根據(jù)其目的可分為全蛋白質(zhì)的“總定量法”和特定蛋白質(zhì)的“個別定量法”。 蛋白定量是生物學(xué)實驗*的一部分。
為驗證細(xì)胞裂解是否成功，或為了將多個樣品進(jìn)行平行實驗比較或標(biāo)準(zhǔn)化保存，需對細(xì)胞裂解液進(jìn)行蛋白定量；為了判定蛋白的產(chǎn)量，需對純化好的蛋白進(jìn)行定量；為了將純化好的蛋白用*或者報告酶進(jìn)行標(biāo)記，同樣需首先對蛋白樣品進(jìn)行定量，以保證標(biāo)記反應(yīng)在適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)濃度下進(jìn)行。 蛋白質(zhì)的定量分析是生物化學(xué)和其他生命學(xué)科員常涉及的分析內(nèi)容。在生化實驗中，對樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確可靠的定量分析，是經(jīng)常進(jìn)行的一項非常重要的工作。蛋白質(zhì)是一種十分重要的生物大分子，它的種類很多，結(jié)構(gòu)不均一，分子量又相差很大，功能各異，這樣就給建立一個理想而又通用的蛋白質(zhì)定量分析的方法帶來了許多具體的因難。 蛋白定量的測試方法有很多種，其中較為常見的有五種，分別是Bradford法、Bradford斑點試驗、Coomassie 斑點試驗、紫外分光度檢測法及BCA法這五種。當(dāng)然，每種方法適用的情況都有所不同。 蛋白定量ECL高敏試劑盒，貨號：K22020 蛋白定量ECL超敏試劑盒，貨號：K22030 蛋白定量BCA法試劑盒，貨號：KTD3001 蛋白定量Bradford法試劑盒，貨號：KTD3002 彩色預(yù)染蛋白質(zhì)Marker (10-180 kDa)，貨號：BMM3001 Bradford法： 該方法用于大多數(shù)蛋白質(zhì)定量是相當(dāng)精確的，特別是用于小分子多肽定量。如核糖核酸酶或*等。但是，去污劑的濃度超過0.2%則影響定量結(jié)果。如TritonX-100，SDS，NP-40等。 BCA法： BCA法特點： 1、靈敏度高，檢測濃度下限達(dá)到25μg/ml，小檢測蛋白量達(dá)到0.5μg，待測樣品體積為1-20μl 。 2、測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80。 3、 在20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。 4、 檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量。 5.、受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響：EDTA小于10mM。DTT小于1mM巰基乙醇低于1mm。 |
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