FluoroSpot熒光免疫斑點實驗可用于單細(xì)胞水平上檢測多種細(xì)胞因子的分泌。和ELISpot一樣，是一種靈敏、操作簡單的方法。在FluoroSpot實驗中，不同細(xì)胞因子的單抗混合物用到了夾心法中。
FluoroSpot優(yōu)勢：
一：靈敏度高，操作簡便，相對穩(wěn)定，應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點。
二：能夠生成更多的數(shù)據(jù)，節(jié)省時間。與免疫斑點相比，使用的細(xì)胞和抗原均較少。
FluoroSpot 原理：
三明治夾心結(jié)構(gòu)在熒光斑點中得以應(yīng)用，不同特異性的單克隆捕獲抗體混合物被包被于96孔板的PVDF膜上，*標(biāo)記的檢測抗體識別一種分泌物，tag標(biāo)記的檢測抗體識別其它的分泌物來實現(xiàn)雙色或三色細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的檢測。通過帶有特定熒光基團的共軛試劑放大信號斑點來檢測，可用自動讀板器進行分析。
三色FluoroSpot分析結(jié)果圖總共可以顯示7個亞群：3個單色的細(xì)胞因子，3個雙色的細(xì)胞因子，1個三色的細(xì)胞群。圖像顯示的是一個三色FluoroSpot分析結(jié)果。用一組CEF肽刺激人的外周血單個核細(xì)胞（PBMC），分別用FITC標(biāo)記IFN-γ、CY3標(biāo)記IL-10和CY5標(biāo)記顆粒酶B（GzB）。Overylay展示的是三個指標(biāo)疊加后得到的結(jié)果。
三色FluoroSpot分析：能夠更容易區(qū)分不同的細(xì)胞因子
Mabtech的FluoroSpot試劑盒用途：
1.用于分析T細(xì)胞響應(yīng)，B細(xì)胞響應(yīng)和分析巨噬細(xì)胞，單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞因子不同的分布描繪不同的亞群。
2.三明治夾心法結(jié)合熒光基團標(biāo)記的檢測試劑能夠?qū)ν粋€孔中兩個或兩個以上的分析物進行分析。
3.對于某些分析物組合，提供帶預(yù)涂板的試劑盒。預(yù)涂板是一種方便的選擇，可以實現(xiàn)更快速的分析，同時將可變性降至低。
艾美捷科技作為專業(yè)的生命科學(xué)領(lǐng)域解決方案供應(yīng)商，為您推薦Mabtech品牌的FluoroSpot“裝備”，適用多種種屬，產(chǎn)品，發(fā)表多篇高分文章。以下列舉出部分的FluoroSpot試劑盒，供您參考。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 | 適用種屬 |
Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit | FS-0110-2 | 2個板子 | 人 |
Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit, pre-coated | FSP-0102-2 | 2個板子 | 人 |
Human IFN-γ/IL-10/IL-17A FluoroSpot kit, pre-coated | FSP-010703-2 | 2個板子 | 人 |
Monkey IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit | FS-2122-2 | 2個板子 | 猴 |
Mouse IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit | FS-4142-2 | 2個板子 | 小鼠 |
Mouse IFN-γ/IL-17A/IL-5 FluoroSpot kit, pre-coated | FSP-414443-2 | 2個板子 | 小鼠 |
Bovine IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit | FS-7172-2 | 2個板子 | 牛 |
PS：以上僅列出部分產(chǎn)品，此外Mabtech還提供10個板子的大規(guī)格包裝的FluoroSpot試劑盒。
FluoroSpot試劑盒的特點和優(yōu)勢：
- 非常適合需要方便靈敏檢測的用戶。
- 設(shè)計用于計數(shù)分泌多種分析物的細(xì)胞。
- 適用人、猴、小鼠、牛、羊等多種種屬的試劑盒可供選擇。
- 包含不同組分的多樣化試劑盒可供客戶選擇。
- 含預(yù)包被板的試劑盒可實現(xiàn)更快速的分析，同時將可變性降至低。
常見疑難問題解答：
1.哪種細(xì)胞類型適合FluoroSpot分析？
FluoroSpot測定基本上可以應(yīng)用于任何想要研究單細(xì)胞水平的蛋白質(zhì)分泌的細(xì)胞。盡管到目前為止該技術(shù)主要用于鑒定抗原活化的T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子和B細(xì)胞分泌抗體，但可以分析非粘附細(xì)胞和粘附細(xì)胞。
2.冷凍細(xì)胞可以用于FluoroSpot嗎？
冷凍保存的細(xì)胞非常適合FluoroSpot。但是細(xì)胞的狀態(tài)對實驗結(jié)果有很大影響，必須規(guī)范凍存/復(fù)蘇程序以獲得高活力的細(xì)胞。
3.完成實驗操作后需多長時間讀取FluoroSpot板，即熒光基團的穩(wěn)定性如何？
如果板保持干燥并且在黑暗中，熒光非常穩(wěn)定，在分析前允許將板保存較長的時間（即幾個月）。但是，為了獲得，我們建議在操作完成后一周內(nèi)對板進行分析。
4.分析FluoroSpot板需要什么類型的分析儀？
FluoroSpot需要分析儀來顯示熒光斑點，因為眼睛無法觀察到斑點。我們建議使用配備濾光片的自動化系統(tǒng)：激發(fā)光（ex）490 nm /發(fā)射光（em）510 nm（FITC），ex 550 nm / em 570 nm（Cy3），ex 640 nm / em 660 nm（Cy5）和四色分析也包括ex 380 nm / em 430 nm（DAPI）。濾波片應(yīng)對特定波長具有選擇性，以避免滲透。為了正確測量多分泌細(xì)胞，分析儀需要能夠創(chuàng)建疊加分析。
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Mabtech公司于1986年創(chuàng)辦于瑞典，是一家歐洲的集研究，開發(fā)，銷售為一體的高科技免疫生物技術(shù)公司。Mabtech公司始終專業(yè)致力于研發(fā)新的單克隆抗體，生產(chǎn)創(chuàng)新的免疫試劑和銷售高品質(zhì)的全配套的免疫試劑盒。公司核心業(yè)務(wù)是致力于優(yōu)化發(fā)展酶聯(lián)免疫斑點法技術(shù) (ELISpot)、熒光免疫斑點法技術(shù) (FluoroSpot) 和酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù) (ELISA) 等免疫學(xué)方法。公司開發(fā)和生產(chǎn)多種針對細(xì)胞因子，免疫球蛋白和載脂蛋白的單克隆抗體，用于生命科學(xué)研究中的體外應(yīng)用。Mabtech的試劑盒可用于研究感染性疾病，癌癥，過敏，移植等免疫反應(yīng)，通常用作疫苗試驗中的監(jiān)測工具。此外，還生產(chǎn)用于獸醫(yī)和心血管研究的試劑盒。
艾美捷科技與國內(nèi)外的生物試劑供應(yīng)商保持著密切的合作關(guān)系，目前已成為眾多的中國總代理或一級代理，主要包括：Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Mabtech、Solis BioDyne等，可以在時間為用戶提供前沿的專業(yè)資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。
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