高 GC 革氏陽(yáng)性細(xì)菌 PCR Mix 5100 次原理

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  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

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RT

即用型PCR

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

高 GC 革氏陽(yáng)性細(xì)菌 PCR Mix 5100 次原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

高 GC 革氏陽(yáng)性細(xì)菌 PCR Mix 5100 次原理合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
高 GC 革氏陽(yáng)性細(xì)菌 PCR Mix 5100 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

水中溶解性試驗(yàn)：合格
層析試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：黃色或橄欖綠色粉末，溶于水。商品常為較穩(wěn)定的氯化〖鋅〗復(fù)鹽
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑，組織化學(xué)研究用
〖保存〗：-20℃，避光
氨基10B
〖英文名稱〗：Amino black 10B；Buffalo black NBR；Acid black 1
〖其他名稱〗：萘酚藍(lán)；水牛NBR；酸性1；苯胺藍(lán)；酸性10B；酸性藍(lán)10B；酸性青光藍(lán)10B；4-氨基-5-羥基-3-(對(duì)硝基苯偶氮)-6-(苯偶氮)-2,7-萘二磺酸二鈉鹽；萘藍(lán)；對(duì)硝基苯偶氮-3,6-二磺酸-1-氨基-8-萘酚-7-偶氮苯鈉鹽
〖CAS號(hào)〗：1064-48-8
C22H14N6Na2O9S2=616.49
〖級(jí)別〗：AR
〖含量〗：≥80%
Lambda Max(nm)：616～620
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：藍(lán)色或褐色粉末。溶于水(呈藍(lán)色)、乙醇(呈深藍(lán)色)和溶纖劑(二乙醇一乙迷)，微溶于丙同，不溶于其他有機(jī)溶劑。遇濃硫酸顯藍(lán)綠色，經(jīng)稀釋成深綠藍(lán)色沉淀。遇濃硝酸顯深綠色溶液。與10%氫氧溶液顯紅色熒光的藍(lán)色溶液。水溶液加入濃鹽酸生成綠藍(lán)色沉淀，加入濃氫氧溶液成藍(lán)色沉淀。染色時(shí)，遇銅；〖鐵〗離子，其色澤前者微有變化，后者略帶淺綠
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)電泳試劑，用于對(duì)聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠和硝酸纖維素膜上蛋白質(zhì)的染色。在電泳后，*固定蛋白質(zhì)在膠上。膠用 0.1% 氨基10B的7% (v/v) 醋酸溶液染至少2 小時(shí)，然后用7% (v/v) 醋酸溶液脫色。檢測(cè)靈敏度大概是考馬斯亮藍(lán)R250的20%。氧化還原指示劑
〖保存〗：RT

小鼠抗 V5 標(biāo)簽單抗   腺嘌呤
小鼠抗 MBP 標(biāo)簽單抗   腺嘌呤硫酸鹽
小鼠抗 MBP 標(biāo)簽單抗   消解酶 ( 溶細(xì)胞酶 ) 干粉
小鼠抗 GFP 標(biāo)簽單抗   硝苯吡啶
小鼠抗 GFP 標(biāo)簽單抗   硝酸纖維素膜，13×20cm
小鼠抗 mCherry 標(biāo)簽單抗   硝酸纖維素膜，13×20cm
小鼠抗 mCherry 標(biāo)簽單抗   *
小鼠 RFP 標(biāo)簽單抗   小 RNA 克隆試劑盒
小鼠 RFP 標(biāo)簽單抗   小膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子
小鼠抗 VSV-G 標(biāo)簽單抗   小牛胸腺 DNA
小鼠抗 T7 標(biāo)簽單抗   小牛胸腺 DNA 溶液
小鼠抗 T7 標(biāo)簽單抗   小鼠 NK 細(xì)胞分離液 1.076
小鼠抗 CBP 標(biāo)簽單抗   小鼠 RFP 標(biāo)簽單抗
小鼠抗 HSV 標(biāo)簽單抗

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