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真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實(shí)驗(yàn)步驟

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真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實(shí)驗(yàn)步驟合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 2100 次實(shí)驗(yàn)步驟按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

C18H16N2O=276.33
〖級(jí)別〗：BS
生物染色試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：棕紅色發(fā)光針狀結(jié)晶或粉末。溶于乙迷(橙色)、揮發(fā)油、苯、濃硫酸、脂肪和油，微溶于乙醇，不溶于水、堿溶液和弱酸?！既埸c(diǎn)〗(冰乙酸結(jié)晶) 166℃。zui大吸收波長(zhǎng) 493(420)nm。有刺激性
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗〖保存〗：RT
蘇丹B
〖英文名稱〗：Sudan black B；Fat black HB；Solvent black3；C.I.26150
〖其他名稱〗：蘇旦B；溶劑3；油溶BT；脂肪HB；2,3-二氫-2,2-二甲基-6-[[4-(苯基偶氮)-1-萘]偶氮]萘嵌間二氮雜苯；脂肪BN
〖CAS號(hào)〗：4197-25-5
C29H24N6=456.55
〖級(jí)別〗：BS
生物染色試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：藍(lán)色結(jié)晶性粉末。溶于丙同和甲苯，微溶于乙醇，幾乎不溶于水?！既埸c(diǎn)〗 126℃。zui大吸收波長(zhǎng) 598(415)nm。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑，細(xì)菌、脂肪染色用，組織化學(xué)中用于區(qū)分石蠟和動(dòng)物脂肪，髓素染色，白細(xì)胞顆粒和高爾基氏器染色，細(xì)胞和組織中類脂質(zhì)的染色
〖保存〗：RT

T7 DNA 聚合酶 ( 未修飾 )   小鼠抗 T7 標(biāo)簽單抗
Poly(U) 聚合酶   小鼠抗 T7 標(biāo)簽單抗
Taq DNA 連接酶   小鼠抗 Tag-100 標(biāo)簽蛋白單抗
T4 RNA 連接酶 1   小鼠抗 Trx 標(biāo)簽蛋白單抗
9° N DNA 連接酶   小鼠抗 Trx 標(biāo)簽蛋白單抗
核酸外切酶 T   小鼠抗 V5 標(biāo)簽單抗
Lambda 核酸外切酶   小鼠抗 V5 標(biāo)簽單抗
RecJf 核酸外切酶   小鼠抗 VSV-G 標(biāo)簽單抗
T7 核酸外切酶