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真菌種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理

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更新時間：2017-01-19 16:33:40瀏覽次數(shù)：411次

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產(chǎn)品簡介

真菌種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

真菌種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
真菌種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

〖保存〗：RT
百里酚
〖英文名稱〗：Thymol；2-Isopropyl-5-methylphenol；Thyme camphor；3-p-Cymenol；4-Isopropyl-m-cresol；Thymic acid
〖其他名稱〗：百里香酚；*；麝香草腦；5-甲基-2-異丙基酚；6-異丙基-3-甲基酚；2-異丙基-5-甲基*；3-羥基對異丙基甲苯
〖CAS號〗：89-83-8
C10H14O=150.22
〖級別〗：AR
〖含量〗：≥98.0%
結(jié)晶點(diǎn)：47～50℃
酸〖堿度〗試驗(yàn)：合格
酚：合格
碳?xì)浠铮汉细?br />〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：無色半透明結(jié)晶。有特殊氣味，微有堿味。能隨水蒸氣揮發(fā)。能溶于醇、醚、氯方、二硫化碳、冰醋酸和堿溶液，微溶于水。25℃時,1g溶于1ml乙醇、1.5ml乙迷、0.7ml氯方、1.7ml橄欖油、約1000ml水中。密度0.96

DNA 磷酸化試劑盒   *溶液 ,50mg/mL
Taq 酶抗體   鹽酸*
Taq 酶抗體   鹽酸*溶液 ,50mg/mL
Real-Time PCR 稀釋液   鹽酸*
ROX 參考染料   洋紅
鏈霉親和素，HRP 標(biāo)記   核糖核苷復(fù)合物 (RVC),0.2M
Bouin 固定液   *
阿爾瑪藍(lán)細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒檢測試劑   液體樣品 DNAout
阿爾瑪藍(lán)細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒檢測試劑   液體樣品 RNAout
*   液體樣品 RNAout
多點(diǎn)突變試劑盒   液體樣品蛋白純化回收試劑盒
冷啟動核酸酶   液相 RNase 清除劑
cDNA 文庫構(gòu)建試劑盒   液相內(nèi)毒素清除劑
白質(zhì)非變性 PAGE 套裝