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無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次實(shí)驗(yàn)方法

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品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細(xì)介紹

無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次實(shí)驗(yàn)方法按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。

產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

對(duì)稀土金屬靈敏度試驗(yàn):合格
吸光度試驗(yàn):合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:深紫紅色粉末。溶于水
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)與稀土元素在酸性溶液中形成藍(lán)紫色絡(luò)合物。用于球墨鑄〖鐵〗中稀土的測(cè)定
〖保存〗:RT
固藍(lán)B鹽
〖英文名稱〗:Fast blue B salt;Fast blue salt BN;o-Dianisidine tetrazotized;Dianisidine blue;Azoic diazo component 48;Di-o-anisidine diazotatezinc double salt;Tetrazotized di-2-anisidine;ZnCl2;Echtblausalz B;Naphthanil diazo blue B salt
〖其他名稱〗:堅(jiān)牢藍(lán)B鹽;重氮藍(lán)B鹽;藍(lán)光重氮色鹽藍(lán);氯化四氮鄰二甲氧基苯胺;牢固蘭B鹽;耐曬蘭B〖鋅〗鹽;堅(jiān)固蘭B鹽;堅(jiān)藍(lán)B〖鋅〗鹽
〖CAS號(hào)〗:14263-94-6 
C14H12N4O2Cl2?ZnCl2=475.47
〖級(jí)別〗:試劑級(jí)
〖含量〗:≥80.0%
〖重金屬〗:≤10ppm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:深綠色或深褐色粉末。對(duì)光敏感,溶于水,zui大吸收波長(zhǎng)371nm
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)組織化學(xué)中用于重氮化偶合反應(yīng)。檢定磷酸酯酶。紙色譜測(cè)定黃酮、胺和酚。0.5%水溶液可作顯色劑。薄層色譜分析測(cè)定黃曲每素。蛋白質(zhì)染色劑
〖保存〗:RT,避光
鄰聯(lián)茴香胺

Ficoll-Paque 介質(zhì)    柱式植物葉綠體 DNAout
Deaza dGTP    柱式植物油 DNAout
雙脫氧 dNTP 套裝    柱式質(zhì)粒 DNAout
dNTP 和引物清除劑    柱式質(zhì)粒 DNAout
魯米諾    離心管 ( 配研磨杵用 ) 
AMPPD    離心管 ( 配研磨杵用 ) 
山羊抗小鼠 IgG(H+L), 堿性磷酸酶標(biāo)記    轉(zhuǎn) ESPES 基因植物 PCR Mix
山羊抗兔 IgG(Fc),堿性磷酸酶標(biāo)記    轉(zhuǎn) ESPES-NOs 基因植物 PCR Mix
山羊抗人 IgG(H+L),堿性磷酸酶標(biāo)記    轉(zhuǎn) Lectin 基因植物 PCR Mix
山羊抗大鼠 IgG(H+L),堿性磷酸酶標(biāo)記    *溶液 ,50mg/mL
驢抗山羊 IgG,堿性磷酸酶標(biāo)記    滋養(yǎng)層細(xì)胞生長(zhǎng)因子
山羊抗兔 IgG(H+L),辣根過氧化物酶標(biāo)記    紫外交聯(lián)儀
山羊抗兔 IgG(H+L),辣根過氧化物酶標(biāo)記    自誘導(dǎo)培養(yǎng)基 (lac 啟動(dòng)子 )
山羊抗小鼠 I


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