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通用型 RT-LAMP 試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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更新時間：2017-01-19 15:24:30瀏覽次數(shù)：574次

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產(chǎn)品簡介

通用型 RT-LAMP 試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

通用型 RT-LAMP 試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

通用型 RT-LAMP 試劑盒50 次實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

甲萘酚：合格
萘：合格
乙醇溶解試驗(yàn)：合格
水溶液反應(yīng)：合格
〖灼燒殘?jiān)剑?le;0.05%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色或極淺黃色結(jié)晶性粉末或薄碎片。微有*氣味。久貯或遇光色漸變深。加熱升華。能隨乙醇或水蒸氣揮發(fā)。能還原氨性*。1g溶于1000ml水、80ml沸水、0.8ml乙醇、17ml氯方、1.3ml乙迷。溶于甘油、橄欖油和氫氧溶液?！枷鄬γ芏取?.22?！既埸c(diǎn)〗121～123℃。沸點(diǎn)285～286℃。閃點(diǎn)161℃。zui大吸收波長(95％乙醇)226、265、275、286、320、331nm(ε91194、3911、4559、3301、1861、2163)。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)溴、氯、氯酸鹽、鈮、銅、亞硝酸鹽和鉀的檢定。一氧化碳、銅、亞硝酸鹽和鉀的測定。烯丙醇、甲醇、氯方等的定性測定。酚磺轉(zhuǎn)移酶的熒光測定底物。乙烯吸收劑。熒光指示劑。酸堿指示劑。
〖保存〗：RT，避光
乙二縮雙（鄰氨基酚）
〖英文名稱〗：GBHA；Glyoxal-bis-(2-hydroxyanil)；Di-(o-hydroxyphenylimino)ethane；2,2′-(Ethanediylidenedinitrilo)diphenol
〖其他名稱〗：乙二縮雙鄰羥苯胺；乙二雙(2-羥基苯胺)；鈣紅；乙二縮雙(鄰氨基*)；乙二-雙(2-羥基縮苯胺)；新鈣試劑
〖CAS號〗：1149-16-2
C14H12N2O2=240.26
〖級別〗：CP
〖熔點(diǎn)〗：194～198℃
乙醇溶解試驗(yàn)：合格

BAY11-7082(NF-κB 抑制劑 )    Rosetta-gami(DE3) 菌種
Brefeldin A( 蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑 )    DH5α 菌種
Camptothecin( * )    柱式鼠尾 DNAout
Canavanine，sulfate(iNOS 抑制劑 )    熱啟動 Tth DNA 聚合酶
Carboxy-PTIO( 一氧化氮清除劑 )    增強(qiáng)型天狼猩紅染色試劑盒
Carboxy-PTIO( 一氧化氮清除劑 )    茜素紅 S 染色試劑盒
Ac-DEVD-CHO(Caspase3 抑制劑 )    超快核酸轉(zhuǎn)膜試劑盒
Catalase( 抗氧化酶 )    Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞
Catechin hydrate( 抗氧化劑 )    天凈沙非同位素探針雜交試劑盒
Cisplatin(DNA 交聯(lián)劑 / 細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑 )    天凈沙非同位素探針雜交試劑盒
Cycloheximide    HMS174（DE3）菌種
Cyclosporin A( 免疫抑制劑 /PP2B 抑制劑 )    柱式探針純化試劑盒
Decitabine *


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