免 RNA 提取 RT-PCR 試劑盒 100 次實(shí)驗(yàn)步驟

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  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

免 RNA 提取 RT-PCR 試劑盒 100 次實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

免 RNA 提取 RT-PCR 試劑盒 100 次實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
免 RNA 提取 RT-PCR 試劑盒 100 次實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹：

合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

〖其他名稱〗：肼黃；食用檸檬黃；酸性黃23；1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)-5-吡唑啉酮-3-羧酸三鈉鹽；食用色素黃色5號(hào)；他特秦
〖CAS號(hào)〗：1934-21-0
C16H9N4Na3O9S2=534.36
〖級(jí)別〗：BS
〖含量〗：≥85.0%
〖重金屬〗：≤40ppm
〖砷〗：≤3ppm
〖鉛〗：≤10ppm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙黃色粉末。21℃時(shí)的溶解度為：水11.8%，10%的乙醇9%，50%的乙醇3%，溶于甘油，丙二醇，不溶于油脂，屬偶氮型酸性染料，耐熱性，耐酸性，耐光性，耐鹽性均好，在檸檬酸及酒石酸等溶液中很安定。耐氧化性較差，遇堿稍變紅，還原時(shí)褪色。〖熔點(diǎn)〗：300℃。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色用。沉淀滴定的吸附指示劑，如用于銀鹽滴定氯和碘離子，也用作氧化還原指示劑。
〖保存〗：RT
誘惑紅
〖英文名稱〗：Allura Red AC；Disodium 6-hydroxy-5-[(2-methoxy-4-sulphonato-m-tolyl)azo]naphthalene-2-sulphonate
〖其他名稱〗：6-羥基-5-［(2-甲氧基-5-甲基-4-磺本基)偶氮］2-萘磺酸二鈉鹽；誘惑紅AC；食品紅17；大紅貝司RC；顯色基艷紅RB；咖喱紅；紅 40 [CI 16035]；C.I.冰染重氮組分13
〖CAS號(hào)〗：25956-17-6

RNase 抑制劑 ( 人源 )   克必隆 RACE 試劑盒
ELISA 試劑盒系列   克必隆 eTS cDNA 文庫(kù)構(gòu)建試劑盒
微量 DNA 助沉劑   克必隆 eTS 抑制性差減雜交 PCR 試劑盒
非凍型組織 DNA 保存液   克必隆 eTS PCR 產(chǎn)物差減雜交試劑盒
非凍型組織 DNA 保存液   克必隆 eTS 細(xì)菌基因組差減雜交試劑盒
動(dòng)物 DNAout   克必隆 eTS RNA 熒光探針制備試劑盒
動(dòng)物 DNAout   克必隆 eTS 核心試劑盒
血液 DNAout   肝素瓊脂糖
血液 DNAout   肝素瓊脂糖
植物 DNAout   克必隆 eTS miRNA RT-PCR 試劑盒
一管式病毒 DNAout   克必隆 eTS miRNA cDNA 文庫(kù)構(gòu)建試劑盒
一管式病毒 DNAout   藍(lán)膠瓊脂糖
DNA 上樣液 ( 紅 ),6×   藍(lán)膠瓊脂糖
DNA 上樣液 ( 藍(lán) ),6×   Protein A 瓊脂糖
克必隆 G 載體   內(nèi)毒素清除親和介質(zhì)
制劑

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