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一步式 RT-PCR Mix 1mL說明書

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更新時間：2017-01-19 15:11:39瀏覽次數(shù)：442次

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產(chǎn)品簡介

一步式 RT-PCR Mix 1mL說明書運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

一步式 RT-PCR Mix 1mL說明書?合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
一步式 RT-PCR Mix 1mL說明書?按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

產(chǎn)品介紹：

?產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

C18H14N2Na2O8S2=496.42
〖級別〗：AR
〖含量〗：≥85.0%
λmax：497～501nm(0.02 mol/L醋酸銨溶液)
干燥減量、〖氯化物〗及〖硫酸鹽〗總量：≤0.2 %
水中不溶物：≤0.2 %
〖砷〗：≤0.0001%
〖鉛〗：≤0.001%
〖重金屬〗(以Pb計)：≤0.002%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙色或紅色至紫紅色粉末。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗

菌落 PCR 試劑盒 2.0   內(nèi)毒素清除親和介質(zhì)
微量核酸沉淀劑   Protein G 瓊脂糖
克必隆常態(tài)轉(zhuǎn)化液   DEAE 交換介質(zhì)
細(xì)菌 RNAout   CM 交換介質(zhì)
細(xì)菌 RNAout   Q 交換介質(zhì)
克必隆 B 載體   SP 交換介質(zhì)
RNase-free CTAB 溶液 ,20%   苯基介質(zhì)
非酶 RNA 清除劑 1.0   丁基介質(zhì)
RNA DEPC ( 焦碳酸二乙酯 )   丁基硫介質(zhì)
Taq DNA 聚合酶   天凈沙甲基化 PCR 2.0 試劑盒
Taq DNA 聚合酶   Phusion DNA 聚合酶
Pfu DNA 聚合酶   E.coli DNA 聚合酶 Ι
dNTP 溶液，2.5mM   磁珠動物 DNAout
   細(xì)菌蛋白酶抑