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更新時(shí)間：2017-01-19 15:09:10瀏覽次數(shù)：446次
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雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 （MMLV-Taq）50 次原理運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理產(chǎn)品介紹：
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。
〖保存〗：RT
日落黃
〖英文名稱〗：Sunset Yellow FCF；Food Yellow 3；C.I. 15985；FD&C Yellow No. 6；Disodium 6-hydroxy-5-[(4-sulphonatophenyl)azo]naphthalene-2-sulphonate
〖其他名稱〗：日落黃FCF；1-對磺酸苯基偶氮-2-羥基萘-6-磺酸二鈉鹽；食用黃色6號；食品黃3；食用桔黃
〖CAS號〗：2783-94-0
C16H10N2Na2O7S2=452.37
〖級別〗：AR
〖含量〗：≥87.0%
干燥減量、〖氯化物〗及〖硫酸鹽〗總量：≤13.0%
水中不溶物：≤0.2 %
〖砷〗：≤3ppm
〖鉛〗：≤10ppm
汞：≤1ppm
鎘：≤1ppm
〖鑒別〗方法：
1.本品0.1g溶于100ml水中，呈黃色澄清溶液。
2.本品微溶于乙醇，不溶于油脂，具有酸性染料的特性，能使動物纖維著色。
3.100ml含有0.001g本品的0.02mol/L乙酸銨溶液，其zui大吸收波長為482±2nm。
4.取本品水溶液做紙上層析，其主色點(diǎn)的Rf值應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次原理dNTP 溶液，2.5mM 柱式內(nèi)毒素清除劑
dNTP 溶液 ,10mM 無內(nèi)毒素水
dNTP 溶液 ,10mM 無內(nèi)毒素槍頭，1 mL
dNTP 溶液，100mM 凝膠法內(nèi)毒素半定量試劑盒
dNTP 溶液，100mM RNA 溶解液
超快核酸電泳液干粉 海藻糖溶液，1.5M，PCR
超快核酸電泳液干粉 無內(nèi)毒素槍頭，200 μL
氨芐*干粉 磁珠血液 DNAout
*干粉 磁珠植物 DNAout
加 A 試劑盒 JM110 感受態(tài)細(xì)胞
,50mg/mL
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