miRNA 熒光定量檢測(cè)試劑盒25 次實(shí)驗(yàn)步驟

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  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

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RT

即用型PCR

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miRNA 熒光定量檢測(cè)試劑盒25 次實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

miRNA 熒光定量檢測(cè)試劑盒25 次實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹：

miRNA 熒光定量檢測(cè)試劑盒25 次實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

硝酸鹽：≤0.01%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色或微帶黃綠色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。略有風(fēng)化性。溶于約0.5份水，溶于乙醇、乙迷
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)各種生物堿、含氮堿、酚、蛋白質(zhì)、蛋白胨、氨基酸、脲酸、脲、血液和糖類的試劑。生物染色。
〖保存〗：RT
賴納克氏鹽
〖英文名稱〗：Reinecke salt；Ammonium reineckate；Ammonium tetrathiocyanatodiamminechromate
〖其他名稱〗：雷氏鹽；利英納克鹽；四硫基二氨絡(luò)鉻酸銨；利英鈉克鹽；二氨基四硫代酸鉻銨；二氨合四硫基鉻酸銨(III)
〖CAS號(hào)〗：13573-16-5
NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]=336.43
〖級(jí)別〗：AR
水溶解試驗(yàn)：合格
對(duì)氯化*靈敏度試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：深紅色結(jié)晶或紅色結(jié)晶性粉末。溶于熱水和乙醇,微溶于冷水。在水溶液中分解游離氫青酸而成藍(lán)色。室溫時(shí)分解約在二周內(nèi)發(fā)生,溫度高于65℃時(shí)速度加快。在沸乙醇中有相似分解發(fā)生?！既埸c(diǎn)〗 268～272℃(分解)。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)比色測(cè)定*及其他有機(jī)堿。伯胺、仲胺、*、羥基*和某些氨基酸的沉淀劑。汞的顯色劑和沉淀劑
〖保存〗：RT
賴納克氏鹽一水物

預(yù)染蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (43.0-200.0 KD)   烷基腺嘌呤 DNA 糖基化酶
DNA 洗脫液   甲酰胺嘧啶 [fapy]-DNA 糖基化酶
DNA 洗脫液   8- 氧代* DNA 糖基化酶
非酶 DNA 清除劑 -2   * -DNA 糖基化酶
即用型 PCR 試劑盒 2.0    *糖基化酶抑制劑
即用型 PCR 試劑盒 2.0    Afu * -DNA 糖基化酶
免質(zhì)粒提取篩選試劑盒   人類單鏈選擇性單功能* -DNA 糖基化酶
一步法單菌落質(zhì)粒 DNAout   DNA 促旋酶 (E.coli)
柱式真菌 DNAout   GpC 甲基轉(zhuǎn)移酶 (M.CviPI)
甜菜堿溶液，5M，PCR    熱敏磷酸酶
一步法質(zhì)粒 DNAout 2.0   無機(jī)焦磷酸酶，熱穩(wěn)定
一步法質(zhì)粒 DNAout 2.0   無機(jī)焦磷酸酶 ( 酵母 )
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )   三磷酸腺苷雙磷酸酶
酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )   ATP 硫酸化酶
t   Dicer(RNase III)

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