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AMV cDNA *鏈合成試劑盒30 次原理

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

AMV cDNA *鏈合成試劑盒30 次原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

AMV cDNA *鏈合成試劑盒30 次原理產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
AMV cDNA *鏈合成試劑盒30 次原理產(chǎn)品介紹：

合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

〖干燥失重〗：≤1.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：金黃色扇狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。溶于約40份水，易溶于熱水，微溶于甲醇和乙醇?！既埸c(diǎn)〗＞300℃。zui大吸收波長(zhǎng)372nm。
〖用途〗：生化研究。光度測(cè)定鈷和鉀。檢定銀、鋇、鈣、鈷、〖鐵〗、〖鎳〗、〖鉛〗。
〖保存〗：RT，避光
雙硫腙
〖英文名稱〗：Dithizone；Diphenylthiocarbazone；1,5-Diphenyl-3-thiocarbazone
〖其他名稱〗：苯肼硫代羰偶氮苯；打薩宗；二苯磺卡貝松；〖鉛〗試劑；苯肼硫碳酰偶氮苯；二苯基硫代卡巴腙；二苯基硫巴腙；二苯硫代偶氮碳酰肼；二苯硫代縮(對(duì)稱)二氨基脲；二苯基硫卡巴腙；二苯基硫代二氨基脲；2-苯基酰肼苯基二氮烯硫代羧酸；打薩腙；二苯硫代卡貝松；二苯硫卡巴腙
〖CAS號(hào)〗：60-10-6
C13H12N4S=256.33
〖級(jí)別〗：AR
分光有效〖含量〗：≥75.0%
吸收比率：≥1.55
靈敏度試驗(yàn)：合格
〖灼燒殘?jiān)?以〖硫酸鹽〗計(jì))：≤0.1%
干燥失量：≤5.0%

柱式動(dòng)物 RNAout   通用 miRNA 克隆接頭
柱式動(dòng)物 RNAout   m7G(5´)ppp(5´)G 帽結(jié)構(gòu)類似物
柱式血液 RNAout   m7G(5´)ppp(5´)A 帽結(jié)構(gòu)類似物
柱式植物 RNAout   G(5´)ppp(5´)A 帽結(jié)構(gòu)類似物
柱式凝固血液 DNAout   G(5´)ppp(5´)G 帽結(jié)構(gòu)類似物
柱式土壤 DNAout   3´-O-Me-m7G(5´)ppp(5´)G 帽結(jié)構(gòu)類似物
柱式動(dòng)物 DNAout   RNase 抑制劑 ( 小鼠源 )
RNA 洗脫液   p19siRNA 結(jié)合蛋白
RNA 洗脫液   p19miRNA 檢測(cè)試劑盒
一管式病毒 DNA-RNAout   ATP 發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒
柱式糞便 DNAout   ADP/ATP 發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒
   ROX 參考染料