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即用型高保真 PCR 試劑盒9mL實(shí)驗(yàn)方法

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

即用型高保真 PCR 試劑盒9mL實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

即用型高保真 PCR 試劑盒9mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專(zhuān)一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
即用型高保真 PCR 試劑盒9mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹：

合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專(zhuān)一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

質(zhì)量吸收系數(shù)α2(λ2,pH 8.5,干樣)：100.0～132.0L/cm·g
〖干燥失重〗：≤3.0%
〖灼燒殘?jiān)?以〖硫酸鹽〗計(jì))：≤0.2%
乙醇溶解試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅棕色結(jié)晶性粉末。溶于乙醇、水、稀酸(黃色)和稀堿(紫色)。其0.1％乙醇溶液或0.04％鈉鹽水溶液用作指示劑
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑，pH 7.2(黃)～8.8(紫紅)； pH 2.0(橙色)～3.0(琥珀色)。
〖保存〗：RT
甲酚紅鈉鹽
〖英文名稱(chēng)〗：Cresol Red sodium salt；o-Cresolsulfonphthalein sodium salt
〖其他名稱(chēng)〗：鄰甲酚磺酰酞鈉鹽；鄰甲酚紅鈉鹽
〖CAS號(hào)〗：62625-29-0
C21H17NaO5S=404.41
〖級(jí)別〗：IND
純度：≥95.0%

氨基染膜液   兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)
半干法電轉(zhuǎn)液 ( 干粉 )   單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)
印跡膜抗體稀釋液   LAMP 擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照
Western 印跡膜封膜液 (NC 膜和 PVDF 膜 )    *
Western 印跡膜洗膜液   鼻腔采樣拭子
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 高 pH)   DNA 樣品采樣拭子
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH)   * A
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 低 pH)   * B
Tricine-SDS-PAGE 上樣液   百萬(wàn)堿基動(dòng)物 DNAout
Tricine-SDS-PAGE 上樣液   百萬(wàn)堿基血液 DNAout
Tricine-SDS-PAGE 陽(yáng)極電泳液 ( 干粉 )   Southern 血液 DNAout
Tricine-SDS-PAGE 陽(yáng)極電泳液 ( 干粉 )   FTA 血片 DNAout
紅 ),6×( 非甘油 )