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雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

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更新時間:2017-01-19 14:15:14瀏覽次數(shù):480次

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產(chǎn)品簡介

雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理產(chǎn)品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。
雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理產(chǎn)品介紹:
雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現(xiàn)多個小片段)。

〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
噻唑橙
〖英文名稱〗:Thiazole Orange;1-Methyl-4-[(3-methyl-2(3H)-benzothiazolylidene)methyl]quinolinium p-tosylate
〖CAS號〗:107091-89-4
C26H24N2O3S2=476.61
〖級別〗:BR
有效分光〖含量〗:~90%
消光系數(shù)Extinction Coefficient:≥65000 (波長Wavelength501-513nm)
消光系數(shù)Extinction Coefficient:≥10000 (波長Wavelength286-290nm)
消光系數(shù)Extinction Coefficient:≥28000 (波長Wavelength235-239nm)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:橙色或紅橙色粉末,〖熔點〗270℃
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
2-氨基吖啶酮
〖英文名稱〗:AMAC;2-Aminoacridone;2-Ami0H-acridin-9-one
〖CAS號〗:27918-14-5
C13H10N2O=210.23

雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理四氧嘧啶    Therminator II DNA 聚合酶
次甲基綠    96 孔板病毒 DNAout( 真空法 )
庚烷磺酸鈉    一步法 96 孔板質(zhì)粒 DNAout( 真空法 )
固綠    一步法96 孔板單菌落質(zhì)粒DNAout( 真空法)
金胺 O    細胞計數(shù)液 (Vi-CELL 儀 )
乙酰丁香酮    Protein A+G 瓊脂糖
聚乙烯聚吡咯烷酮    即用型 GFP 標簽蛋白裂解液
聚乙二醇 12000    動態(tài)顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒
聚乙二醇 20000    動態(tài)濁度法內(nèi)毒素定量試劑盒
聚乙二醇 3350    WGA 糖蛋白分離試劑盒
聚乙二醇 4000    大提柱式酵母 DNAout
聚乙二醇 6000    小牛胸腺 DNA 溶液
聚乙二醇 8000    DNA 探針變性液
聚乙二醇溶液    MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 (H-)
硫酸*    耐熱型 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 (H-)
碘化丙啶苯    96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 真空法 )
活性藍 19    PCR Mix 染料
馬來酸鈉    DAB 法*雜交試劑盒
硼氫化氰鈉    TMB 法*雜交試劑盒
乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺    ATP 溶液,2.5mM
-2- 苯基吲哚


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