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dCTP 溶液，2.5mM2mL說明書

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  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

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產(chǎn)品簡介

dCTP 溶液，2.5mM2mL說明書運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

dCTP 溶液，2.5mM2mL說明書產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
dCTP 溶液，2.5mM2mL說明書合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

〖級別〗：Practical grade
λmax：360～380nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：黃色粉末。溶解度：1 mg/ml in water:ethanol (1:1)
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
β-萘酚紫
〖英文名稱〗：β-Naphthol Violet
〖其他名稱〗：4-[[4-(苯甲酰氨基)-2-甲氧基-5-甲基苯基]偶氮]-3-羥基-N-苯基-2-萘甲酰胺
〖CAS號〗：7143-21-7
C16H9N3Na2O9S2=497.37
〖級別〗：BR
Lambda max：508～511nm(H2O)
Absorbance(E1%1cm)：min. 520(5mg/L, H2O, 508～511nm)
Drying loss：≤10.0%
Sensitiveness：Pass

埃文斯藍(lán)   PLP 固定液
對硝基苯 -β-D- 吡喃半乳糖苷   PLPD 固定液
L- *鹽酸鹽   Methacarn 固定液
腺嘌呤硫酸鹽   PFG 固定液
酸性品紅   對苯醌固定液
α- 酮戊二酸   ECD-G 固定液
苯甲基磺酰   細(xì)胞周期與凋亡檢測試劑盒（PI 法）
異硫氰酸熒光素   Zamboni 固定液
亞精胺三鹽酸鹽   考馬斯亮藍(lán) R-250 染液
6- 羧基二乙酸熒光素   DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞
章魚堿   SYBR Green II 核酸染料
D- 甘露糖   酸水解酪素
二硫蘇糖醇 (DTT)   DMEM( 高糖 )
N- 苯甲酰 -L- *乙酯   DMEM( 低糖 )
5′ - 三磷酸鳥苷三鈉