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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-19 14:09:06瀏覽次數(shù):264次
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dTTP 溶液,100mM0.5mL實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。
dTTP 溶液,100mM0.5mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
dTTP 溶液,100mM0.5mL實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。
C9H6O2=146.14
〖級別〗:BR
〖含量〗:≥97%
〖熔點(diǎn)〗:117~124℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:黃色粉末或結(jié)晶。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
4-芐基氨基-7-硝基苯并氧雜惡二唑
〖英文名稱〗:BBD;7-Benzylamino-4-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole;4-Benzylamino-7-nitrobenzofurazan
番紅 O 非蛋白型 Western 封堵液
*鈉 腦心浸液
茚三酮 哺乳動(dòng)物雙雜交試劑盒
甲基紅 柱式石蠟包埋組織 DNAout2.0(二代測序)
鹽酸胍 柱式微生物基因組 DNAout
* 單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增試劑盒
氫 酚 - 混合液 (RNA 提取 )
苔素 酚 - 混合液 (DNA 提取 )
β- 硫代*酸 超敏化學(xué)發(fā)光(HRP)檢測試劑盒 2.0
D- 核糖 超敏化學(xué)發(fā)光(HRP)檢測試劑盒 2.0
D- * B-5 固定液
菌素 D Verhoeff 固定液
乙酰水楊酸
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