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微量單鏈 DNA 定量試劑盒1mL實(shí)驗(yàn)步驟

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微量單鏈 DNA 定量試劑盒1mL實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

微量單鏈 DNA 定量試劑盒1mL實(shí)驗(yàn)步驟磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記：
當(dāng)摻入水平很低的時(shí)候，需要使用本步驟，即通過(guò)體積排阻色譜或過(guò)濾試劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱（需另購(gòu)）對(duì)于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個(gè)堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來(lái)純化長(zhǎng)度不小于 10 個(gè) 堿基的寡核苷酸。

微量單鏈 DNA 定量試劑盒1mL實(shí)驗(yàn)步驟使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長(zhǎng) 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無(wú)水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。注：通過(guò)第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時(shí)，乙醇沉淀后用凝膠過(guò)濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質(zhì)時(shí)，請(qǐng)?jiān)诘?br />8 步之后進(jìn)行。
產(chǎn)品介紹：

磷酸化反應(yīng)標(biāo)記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個(gè)微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無(wú)水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。

去離子甲酰胺   100mL   新生霉素
BLOTTO 溶液   100mL   L- *
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )   1.5mL   β-D- 阿糖胞苷
酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )   1.5mL   8- 羥基喹啉
Denhardt 溶液，50×   100mL   細(xì)胞松弛素 B
Denhardt 溶液，50×   100mL 銨 T
鮭魚(yú)精 DNA 溶液   1mL   N ,N- 雙 (2- 羥乙基 ) *
鯡魚(yú)精 DNA 溶液   1mL   D- 葡萄糖 -1- 磷酸二鈉
小牛胸腺 DNA 溶液   1mL   伊紅 Y, 醇溶性
熒光尺   1個(gè)   十二烷基硫酸鈉
硫酸葡聚糖   1g   乙酸－ 2 －萘脂
聚乙二醇   100g   硫酸鐵
酪蛋白   50g   丁酸鈉
脫脂奶粉 ( 雜交 )   50g   氯化血紅素
即用型封堵液 (NC )    50mL   N-2- 羥乙基 -N’-3- 丙磺酸
即用型封堵液 (Nylon )   50mL   焦碳酸二乙酯
硝酸纖維素膜，13×20cm   1張   二磷酸腺苷二鈉

Phenosafranine酚藏紅花5克高純，70%
MOPSMOPS超純級(jí)白色精細(xì)結(jié)晶粉末RTsigma
Pepsin(porcinestomachmucose)胃液素100克生物技術(shù)級(jí)，300u/mg
FERRICCHLORIDEHEXAHYDRATE氯化鐵,六水ACS級(jí)黃橙色大固體塊COLD不sigma
PBS(Phosphatebuffersaline)powderedPBS嶙酸鹽緩沖液25克AR，99%
HEMATOXYLIN蘇木精高純級(jí)淺棕色粉末RTsigma
Oxytetracyclinehydrochloride鹽酸地霉素250毫克BR，95%
BIS-TRISBis-Tris超純級(jí)白色結(jié)晶粉末RTsigma
OPA鄰苯二醛25克BR,50%，分子量1800-2000，液體
TRITON®X-114曲拉通 X-114試劑級(jí)透明粘稠液體RTsigma
o-Cresolphthaleincomplexon酞紫500毫克ACS，50%
TTC2,3,5-氯化三苯基四氮唑試劑級(jí)白色至米白色至淡黃色結(jié)晶粉末C-DYEsigma
Norfloxacin氟呱酸100KU混合體，95%
O-NITROPHENYL-β-D-GALACTOPYRANOSIDE(oNPG)鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷超純級(jí)白色至米白色精細(xì)結(jié)晶粉末FROZENsigma
Nickeloxa