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DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10 次實(shí)驗(yàn)方法

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產(chǎn)品簡介

DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10 次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹：

DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10 次實(shí)驗(yàn)方法使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時(shí)，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質(zhì)時(shí)，請?jiān)诘?br />8 步之后進(jìn)行。
DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10 次實(shí)驗(yàn)方法磷酸化反應(yīng)標(biāo)記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10 次實(shí)驗(yàn)方法磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記：
當(dāng)摻入水平很低的時(shí)候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個堿基的寡核苷酸。

PotatoDextroseWater
WS瓊脂 250(g) incubation media WS瓊脂 250(g)
10% NaC1胰胨水發(fā)酵管 10% NaC1胰胨水發(fā)酵管 20支 BR
啤酒檢驗(yàn)系列incubationmedia啤酒檢驗(yàn)系列
波爾頓選擇性增菌肉湯 250g 用于彎曲桿菌選擇性增菌培養(yǎng)
綜合馬鈴薯培養(yǎng)基250g用于真菌的分離培養(yǎng)
葡萄糖銨培養(yǎng)基 250(g) incubation media 葡萄糖銨培養(yǎng)基 250(g)
山梨酸發(fā)酵管山梨酸發(fā)酵管 20支 BR
MRS瓊脂基礎(chǔ)250用于食品中乳酸菌總數(shù)測定incubationmediaMRS瓊脂基礎(chǔ)250用于食品中乳酸菌總數(shù)測定
BoltonSelectiveEnrichmentbroth
IntergratedPotatoMedium
葡萄糖半固體培養(yǎng)基 250(g) incubation media 葡萄糖半固體培養(yǎng)基 250(g)
木糖發(fā)酵管木糖發(fā)酵管 20支 BR
UBA培養(yǎng)基250用于啤酒中厭氧菌檢測incubationmediaUBA培養(yǎng)基250用于啤酒中厭氧菌檢測
CCDA基礎(chǔ) 250g 用于彎曲桿菌分離培養(yǎng)(WHO方法)
沙氏葡萄糖肉湯(SDB)250g用于霉菌和酵母菌的增菌培養(yǎng)
動力-吲哚-尿素培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MIU) 250(g) incubation media 動力-吲哚-尿素培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MIU) 250(g)
鼠李糖發(fā)酵管鼠李糖發(fā)酵管 20支 BR
NBB培養(yǎng)基250用于啤酒中厭氧菌檢測incubationmediaNBB培養(yǎng)基250用于啤酒中厭氧菌檢測
CCDABase
SabouraudDextroseBroth
SIM培養(yǎng)基 250(g) incubation media SIM培養(yǎng)基 250(g)
棉子糖發(fā)酵管棉子糖發(fā)酵管 20支 BR
Raka-Ray培養(yǎng)基250用于啤酒中乳酸菌檢測和分離培養(yǎng)incubationmediaRaka-Ray培養(yǎng)基250用于啤酒中乳酸菌檢測和分離培養(yǎng)
CCDA添加劑 2ml*5支每支添加于200mlCCDA基礎(chǔ)中

DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10 次實(shí)驗(yàn)方法〖級別〗：AR
〖含量〗：≥98.0%
〖熔點(diǎn)〗：68～70℃
乙醇溶解試驗(yàn)：合格
〖灼燒殘?jiān)剑?le;0.1%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：無色斜方或長方晶體或粉末。有香莢蘭豆香，有灼燒味，味苦。溶于乙醇、乙迷、氯方、揮發(fā)油和氫氧化堿溶液中，微溶于沸水?！枷鄬γ芏取?d204)0.935?！既埸c(diǎn)〗68～70℃。沸點(diǎn)297～299℃。閃點(diǎn)162℃。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)熒光指示劑。
〖保存〗：RT，避光
酸性偶氮紅
〖英文名稱〗：Azophloxine；Acid Red 1；Disodium 5-acetylamino-4-hydroxy-3-(phenylazo)naphthalene-2,7-disulphonate
〖其他名稱〗：偶氮熒光桃紅；偶氮焰紅；酸性紅1；食品紅10；5-(乙?；被?-4-羥基-3(苯基偶氮)-2,7-萘二磺酸二鈉鹽；酸性紅G；酸性大紅G；偶氮螢光桃紅；8-乙酰氨基-2-苯偶氮基-1-萘酚基-3,6-二磺酸二鈉鹽
〖CAS號〗：3734-67-6
C18H13N3Na2O8S2=509.42
reen；4,4′