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TdT 加尾法 DNA *標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法

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TdT 加尾法 DNA *標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

TdT 加尾法 DNA *標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長(zhǎng) 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時(shí)，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質(zhì)時(shí)，請(qǐng)?jiān)诘?br />8 步之后進(jìn)行。
TdT 加尾法 DNA *標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹：

磷酸化反應(yīng)標(biāo)記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個(gè)微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記：
當(dāng)摻入水平很低的時(shí)候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱（需另購(gòu)）對(duì)于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個(gè)堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長(zhǎng)度不小于 10 個(gè) 堿基的寡核苷酸。

〖其他名稱〗：無色孔雀石綠；隱性孔雀石綠；二(對(duì)二甲氨基苯基)苯基甲烷；隱色孔雀綠；P,P'-亞芐雙-N,N-二甲苯胺；還原孔雀綠；P,P'-亞芐雙-N,N'二甲胺苯
〖CAS號(hào)〗：129-73-7
C23H26N2=330.47
〖級(jí)別〗：Analytical standard
〖含量〗：≥98.0%（HPLC）
〖熔點(diǎn)〗：100～102℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色至棕褐色或淡藍(lán)色或淡綠色粉末。是孔雀石綠的酸性還原物,含有一定量的〖鋅〗鹽。對(duì)光敏感?？諝庵幸籽趸Ｒ兹苡诒?、甲苯、乙迷,溶于乙醇,微溶于石油英,不溶于水。〖熔點(diǎn)〗102℃(94℃)。沸點(diǎn)(分解)。zui大吸收波長(zhǎng)623nm
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑。顯色劑。檢定鈰、銥、〖鐵〗。金的光度測(cè)定。痕量錳的催化光度測(cè)定。使用前，在P2O5干燥器中干燥48小時(shí)以上，以除去水分。使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)，避免吸入或與皮膚接觸。產(chǎn)品開封后，應(yīng)盡快恢復(fù)密封狀態(tài)，在規(guī)定條件下〖保存〗
〖保存〗：RT，避光
石炭酸復(fù)紅
〖英文名稱〗：Carbol fuchsin
〖其他名稱〗：石炭酸品紅；卡寶品紅；酚品紅；哥瑞母氏石碳酸品紅；石碳酸品紅；*品紅
〖CAS號(hào)〗：4197-24-4
〖級(jí)別〗：IND
紅外光譜〖鑒別〗：合格
紫外光譜：合格
λmax（in water)：約542 nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：粉末為暗綠色至褐色粉末，液體為暗綠色至褐色液體，是*與堿性品紅的混合物，對(duì)光和空氣敏感。zui大吸收波長(zhǎng)547nm。粉末應(yīng)用時(shí)溶于乙醇后，再加蒸餾水稀釋

WLD培養(yǎng)基250g用于釀造和工業(yè)發(fā)酵過程中細(xì)菌分離培養(yǎng)
MLCB瓊脂 250(g) incubation media MLCB瓊脂 250(g)
1% NaC1甘露糖發(fā)酵管 1% NaC1甘露糖發(fā)酵管 20支 BR
抗生素檢定培養(yǎng)基6號(hào)250用于粘菌素等的效價(jià)測(cè)定incubationmedia抗生素檢定培養(yǎng)基6號(hào)250用于粘菌素等的效價(jià)測(cè)定
Nalidixicacidstrip
WLDMedium
胰蛋白胨大豆肉湯(TSB) 250(g) incubation media 胰蛋白胨大豆肉湯(TSB) 250(g)
3.5% NaC1葡萄糖磷酸鹽胨水發(fā)酵管 3.5% NaC1葡萄糖磷酸鹽胨水發(fā)酵管 20支 BR
抗生素檢定培養(yǎng)基7號(hào)250用于噻肟鈉等的效價(jià)測(cè)定incubationmedia抗生素檢定培養(yǎng)基7號(hào)250用于噻肟鈉等的效價(jià)測(cè)定
改良Camp-BAP氏瓊脂添加劑A 1ml*5 添加于HB0243中
不*瓊脂培養(yǎng)基250g用于紡織品微真菌影響評(píng)價(jià)試驗(yàn)
胰蛋白胨大豆肉湯(TSB) 1000(g) incubation media 胰蛋白胨大豆肉湯(TSB) 1000(g)
氨基酸脫羧酶對(duì)照發(fā)酵管氨基酸脫羧酶對(duì)照發(fā)酵管 20支 BR
抗生素檢定培養(yǎng)基8號(hào)250用于去甲*等的效價(jià)測(cè)定incubationmedia抗生素檢定培養(yǎng)基8號(hào)250用于去甲*等的效價(jià)測(cè)定
ModifiedCamp-BAPAgaradditiveA
IncompleteAgarMedium
10%鈉胰蛋白胨大豆肉湯 250(g) incubation media 10%鈉胰蛋白胨大豆肉湯 250(g)
3% NaC1氨基酸脫羧酶對(duì)照發(fā)酵管 3% NaC1氨基酸脫羧酶對(duì)照發(fā)酵管 20支 BR
抗生素5號(hào)250用于*檢定菌種培養(yǎng)incubationmedia抗生素5號(hào)250用于*檢定菌種培養(yǎng)
改良Camp-BAP氏瓊脂添加劑B 1ml*5 添加于HB0243中
ISP培養(yǎng)基2250g用于鏈霉菌培養(yǎng)和鑒別
Baird-Parker 瓊脂基礎(chǔ) 250(g) incubation media Baird-Parker 瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
3.5% NaC1氨基酸脫羧酶對(duì)照發(fā)酵管 3.5% NaC1氨基酸脫羧酶對(duì)照發(fā)酵管 20支 BR
MUG培養(yǎng)基于大腸桿菌測(cè)定incubationmediaMUG培養(yǎng)基于大腸桿菌測(cè)定
ModifiedCamp-BAPAgaradditiveB
ISPMedium2
Baird-Par