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PCR 法 DNA 探針標記試劑盒5次實驗方法

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更新時間：2017-01-17 16:15:06瀏覽次數：315次

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產品簡介

PCR 法 DNA 探針標記試劑盒5次實驗方法運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

PCR 法 DNA 探針標記試劑盒5次實驗方法產品介紹：

PCR 法 DNA 探針標記試劑盒5次實驗方法使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質時，請在第
8 步之后進行。
磷酸化反應標記：
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應（前反應）：
1. 在微量離心管中制備下列反應液：

2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記：
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個堿基的寡核苷酸。

胰酪胨大豆瓊脂(TSA)250g用于藥品或生物制品中總需氧菌計數
卵黃*高鹽瓊脂基礎 250(g) incubation media 卵黃*高鹽瓊脂基礎 250(g)
尿素酶發(fā)酵管尿素酶發(fā)酵管 20支 BR
SS瓊脂250選擇性培養(yǎng)基，用于沙門氏菌，志賀氏菌的選擇性分離incubationmediaSS瓊脂250選擇性培養(yǎng)基，用于沙門氏菌，志賀氏菌的選擇性分離
吲哚乙酸酯紙片 20片/瓶用于空腸彎曲菌吲哚乙酸酯水解試驗
TryptoseSoyaAgar
改良Giolitti-Cantoni 肉湯 250(g) incubation media 改良Giolitti-Cantoni 肉湯 250(g)
明膠發(fā)酵管明膠發(fā)酵管 20支 BR
伊紅美藍瓊脂(EMB)250弱選擇性培養(yǎng)基，用于腸道菌的選擇性分離incubationmedia伊紅美藍瓊脂(EMB)250弱選擇性培養(yǎng)基，用于腸道菌的選擇性分離
3%過氧化氫酶試劑 2ml*20 用于空腸彎曲菌過氧化氫酶試驗
紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂250g用于藥品及生物制品中耐膽鹽革蘭氏陰性菌分離培養(yǎng)
Vogel–Johnson 瓊脂基礎 250(g) incubation media Vogel–Johnson 瓊脂基礎 250(g)
木糖-明膠培養(yǎng)基發(fā)酵管木糖-明膠培養(yǎng)基發(fā)酵管 20支 BR
三糖鐵瓊脂(TSI)250用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選(葡萄糖，乳糖，蔗糖)incubationmedia三糖鐵瓊脂(TSI)250用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選(葡萄糖，乳糖，蔗糖)
含100mlBolton肉湯均質袋 10個/包用于空腸彎曲菌選擇性增菌培養(yǎng)。
VioletRedBileGlucoseAgar
哥倫比亞CNA瓊脂 100(g) incubation media 哥倫比亞CNA瓊脂 100(g)
七葉苷發(fā)酵管七葉苷發(fā)酵管 20支 BR
XLD瓊脂250選擇性培養(yǎng)基，用于志賀氏菌的選擇性培養(yǎng)(FDA標準)incubationmediaXLD瓊脂250選擇性培養(yǎng)基，用于志賀氏菌的選擇性培養(yǎng)(FDA標準)
改良Skirrow瓊脂平板 10個/包用于空腸彎曲菌的分離培養(yǎng)

〖級別〗：IND
〖熔點〗：≥330℃
UV absorption：λmax 605～615nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：暗褐色或黑色結晶粉末，不溶于水
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)在用EDTA滴定Ca、Mg金屬離子時作為指示劑
〖保存〗：RT
吖啶紅
〖英文名稱〗：Acridine red；Dimethyl diaminoxanthenyl chloride；C.I.45000
〖其他名稱〗：二甲基二氨基呫噸基氯；氯化二甲基二氨基呫噸；丫啶紅
〖CAS號〗：2465-29-4
C15H15ClN2O=274.75
321.33