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隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法

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更新時間：2017-01-16 12:10:50瀏覽次數(shù)：406次

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產(chǎn)品簡介

隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質(zhì)時，請?jiān)诘?br />8 步之后進(jìn)行。
隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹：

磷酸化反應(yīng)標(biāo)記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記：
當(dāng)摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個堿基的寡核苷酸。

AFAP 英文名稱：微絲相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
ADORA1 英文名稱：腺苷A1A受體抗體 0.2ml
ARSB 英文名稱：芳基硫酸酯酶B抗體 0.2ml
ABAT 英文名稱： γ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體 0.1ml
A2BP1 英文名稱：共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
ADAM17 英文名稱：腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶 0.1ml
ARNT2 英文名稱：芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體 0.2ml
ABH8 英文名稱： AlkB同源蛋白8抗體 0.2ml
ABI3BP 英文名稱： ABI基因家族成員3結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
ARHGAP20 英文名稱： Rho GTP酶激活蛋白20抗體 0.2ml
ASB10 英文名稱：含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體 0.1ml
ALDH1L1 英文名稱：乙醛脫氫酶1蛋白家族L1抗體 0.1ml
Axin 2 英文名稱：軸抑制蛋白2抗體 0.2ml
ANGPTL6 英文名稱：血管生成素相關(guān)蛋白6抗體 0.2ml
AMH 英文名稱： Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體 0.2ml
EphA8 英文名稱： *蛋白激酶受體A8抗體 0.2ml
Acetoacetyl-CoA synthetase 英文名稱：脂肪酰*家族成員1抗體 0.2ml
ARNTL2 英文名稱：芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣2抗體 0.2ml
phospho-AANAT (Thr29) 英文名稱：磷酸化芳香胺N-乙?；D(zhuǎn)移酶抗體 0.1ml
ABLIM1 英文名稱：肌動蛋白結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
AMIGO2 英文名稱：粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 0.2ml
Advillin 英文名稱：肌動蛋白結(jié)合蛋白DOC6抗體 0.2ml
AFG3L2 英文名稱： AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白28抗體 0.2ml

小鼠CXCR4(mouse CXCR-4) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠皮質(zhì)酮(mouse Corticosterone) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠環(huán)氧化酶-2 (mouse COX-2) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠結(jié)締組織生長因子(mouse CTGF) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4 (mouse CTLA-4) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠細(xì)胞色素P450(mouse Cytochrome P450) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠C反應(yīng)蛋白(mouse CRP) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠CXC趨化因子受體3(mouse CXCR3) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠CXC趨化因子配體16(mouse CXCL16) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠CXCL1/KC(mouse KC) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠*(mouse cAMP) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠環(huán)磷酸鳥苷(mouse cGMP) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(mouse CNTF) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠可溶性CD36分子(mouse sCD36) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠sCD40配體(mouse sCD40 Ligand) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠CD34(mouse CD34) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(mouse sCD40L) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠補(bǔ)體C3a(mouse C3a) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠補(bǔ)體C5a(mouse C5a) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血清總補(bǔ)體(mouse CH50) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠肌酸激酶(mouse CK) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠肌酸激酶同工酶(mouse CK-MB) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝