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原化細胞標本的處理方法

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原化細胞操作步驟:
1. 加規(guī)范品:在酶標包被板上設(shè)規(guī)范品孔,順次參加不一樣濃度的規(guī)范品50ul(主張每個濃度做2個平行孔)
2. 加樣:別離設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作一樣)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl,然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗刷:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔參加酶標試劑50μl。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進行。
標本的處理方法:
(1)血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
(3)尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,胸腹水、腦脊液參照實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(5)組織標本:切割標本后,稱取重量,加入一定量的PBS,PH7.4,用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?,標本融化后仍然保?-8℃的溫度。
原化細胞EpiCM-a-prf    動物上皮細胞培養(yǎng)基    500 ml
MCM-prf    腎系膜細胞培養(yǎng)基    500 ml
UCM-prf    尿道上皮細胞培養(yǎng)基    500 ml
PEpiCM-prf    前列腺上皮細胞培養(yǎng)基    500 ml
ObM-prf    成骨細胞培養(yǎng)基    500 ml
SM-prf    滑膜細胞培養(yǎng)基    500 ml
NPCM-prf    髓核細胞培養(yǎng)基    500 ml
HM-prf    肝細胞培養(yǎng)基    500 ml
SteCM-prf    星形細胞培養(yǎng)基    500 ml
CMM-prf    心肌細胞培養(yǎng)基    500 ml
CEpiCM-prf    角膜上皮細胞培養(yǎng)基    500 ml
TM-prf    滋養(yǎng)層細胞培養(yǎng)基    500 ml
PAM-prf    前脂肪細胞培養(yǎng)基    500 ml
PADM-prf    前脂肪細胞分化培養(yǎng)基    500 ml
OEpiCM-prf    卵巢上皮細胞培養(yǎng)基    500 ml
MSCM-prf    間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基    500 ml
MSCM-sf-prf    間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基    500 ml
MSCM-acf-prf    間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基    
MODM-prf    間充質(zhì)干細胞成骨細胞分化培養(yǎng)基    500 ml
MADM-prf    間充質(zhì)干細胞脂肪細胞分化培養(yǎng)基    500 ml
MCDM-prf    間充質(zhì)干細胞軟骨細胞分化培養(yǎng)基    500 ml
ECGS    內(nèi)皮細胞生長添加物    5 ml
SMCGS    平滑肌細胞生長添加物    5 ml原化細胞

 


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