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β-伴球蛋白(β-conglycinin)ELISA試劑盒操作程序
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:
320 pg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
160 pg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
80 pg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40 pg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20 pg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加樣:1)空白孔,空白對照孔不加樣品,*標(biāo)記的抗Soybean β-conglycinin抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好*抗體,故不加);3)代測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗Soybean β-conglycinin抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
7. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
8. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
9. β-伴球蛋白(β-conglycinin)ELISA試劑盒根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。
γ-環(huán)糊精(G0150000
α-六六六(H0250000
SCYTALONE(RG180445
RUSCIN(P1815
RUBESCENSIN A(RG18 9 5
RUBESCENSIN A(RG18 9
ROSMARINIC ACID(RG18 71
ROSARIN(P18 665
ROSARIN(P18 661
ROSARIN(P18 66-025
ROSARIN(P18 66
ROBINETINIDIN CHLORIDE(SH18 40
β-伴球蛋白(β-conglycinin)ELISA試劑盒
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