抗T淋巴細(xì)胞單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞；CD3使用說明書

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抗T淋巴細(xì)胞單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞；CD3使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	抗T淋巴細(xì)胞單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞；CD3使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 抗T淋巴細(xì)胞單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞；CD3使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性半貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限未定

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
MAPK1/ERK3 (Mitogen-activated protein kinase 3; P44MAPK)   絲裂原活化蛋白激酶3抗原
MAPK4(Mitogen-activated protein kinase 4)   絲裂原活化蛋白激酶4抗原
ER- Alpha(phospho-Ser167)peptide   人磷酸化雌激素受體α多肽抗原
ER- Alpha(phospho-Tyr537)peptide   磷酸化雌激素受體α抗原
ER- Alpha /ER alpha peptide   雌激素受體α抗原
ER- Alpha/ER alpha peptide   雌激素受體α抗原
ER- Beta (Estrogen receptor-beta) peptide   雌激素受體β抗原
ets1/E26 (E-twenty six 1)   Ets轉(zhuǎn)錄因子家族e(cuò)ts1抗原
EV71(Human enterovirus 71)VP1(CT)   腸道病毒71型/手足口病病毒抗原(C端)地榆Sanguisorba officinalis   3-O-p-Coumaroyloleanolic acid   3-O-對(duì)香豆酰*   151334-06-4   C39H54O5   ≥95%
金露花Duranta repens   3-O-trans-p-Coumaroyltormentic acid   3-O-反式對(duì)香豆酰委陵菜酸   121064-78-6   C39H54O7   ≥97%
南美蟛蜞菊Wedelia trilobata   3α-Cinnamoyloxypterokaurene L3   3ALPHA-肉桂酰氧基-9BETA-羥基-等效-貝殼杉-16-烯-19-酸   79406-13-6   C29H36O5   ≥95%
紫莖澤蘭Eupatorium adenophorum   4-Cadinen-7-ol   4-杜松萜烯-7-醇   217650-27-6   C15H26O   ≥95%
割舌樹Walsura robusta   Cabraleadiol   南美楝屬二醇   67253-01-4   C30H52O3   ≥99%
漿果楝Cipadessa baccifera   Cabraleadiol 3-acetate   3-乙酸南美楝屬二醇酯   35833-62-6   C32H54O4   ≥95%
割舌樹Walsura robusta   Cabraleahydroxylactone   3-表南美楝羥基內(nèi)酯   35833-69-3   C27H44O3   ≥95%
山楝Aphanamixis polystachya   Cabralealactone   none   19865-87-3   C27H42O3   ≥95%

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