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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司


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發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞；G1使用說明書

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品       牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地上海市

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更新時(shí)間：2017-02-07 08:43:19瀏覽次數(shù)：236次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞；G1使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱 發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞；G1使用說明書
貨期3－5天
發(fā)貨地上海

細(xì)胞名稱  發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞；G1使用說明書
形態(tài)特性   上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性  貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況  C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  未定

 復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
 操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
地果Ficus tikoua    α-Amyrin acetate    Alpha-乙酸香樹脂醇酯    863-76-3    C32H52O2    ≥95%
地果Ficus tikoua    α-Amyrin palmitate    Alpha-軟脂酸香樹精酯    22255-10-3    C46H80O2    ≥95%
滇南美登木Maytenus austroyunnanensis    β-Amyrenonol    Β-香樹脂酮醇    38242-02-3    C30H48O2    ≥98%
滇南美登木Maytenus austroyunnanensis    β-Amyrenonol acetate    β-香樹脂酮醇 乙酸酯    5356-56-9    C32H50O3    ≥95%
Kopsia yunnanensis    β-Amyrin    beta-香樹精    559-70-6    C30H50O    ≥97%
Cannabis sativa    β-Amyrin acetate    β-香樹脂醇乙酸酯    1616-93-9    C32H52O2    ≥97%
Kopsia yunnanensis    β-Amyrin palmitate    軟脂酸-Beta-香樹精酯    5973/6/8    C46H80O2    ≥95%
山楝Aphanamixis polystachya    β-Amyrone    beta-白檀酮    638-97-1    C30H48O    ≥95%
九里香Murraya exotica    δ-Amyrin acetate    乙酸-Delta-香樹精酯    51361-60-5    C32H52O2    ≥95%
鞭打繡球Hemiphragma heterophyllum    (E)-2-(3,4-Bis(acetyloxy)phenyl)ethyl 3-O-(2,3,4,6-tetra-O-acety    (E)-2-(3,4-雙(乙酰氧基)苯基)乙基 3-O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-beta-D-吡喃葡萄糖基)-beta    132302-25-1    C49H56O26    ≥95%
當(dāng)歸Angelica sinensis    (Z)-Butylidenephthalide    none    72917-31-8    C12H12O2    ≥95%CD14(cluster of differentiation antigen 14)    CD14/內(nèi)毒素受體抗原
CD28    CD28抗原
CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule)    活化白細(xì)胞粘附分子抗原
CD177/NB1 peptide    嗜中粒細(xì)胞抗原CD177抗原
CD24    CD24抗原
CD2AP (CD2-associated protein)    白細(xì)胞分化抗原CD2AP
CD33/Siglec-3(mouse ret)    CD33抗原(大、小鼠）
 CD34    CD34抗原（細(xì)胞表面的唾液粘蛋白）
CD38(mouse, rat)    CD38多肽（小鼠、大鼠）
CD38(human)    CD38抗原（人）
CD36    CD36（多肽）

 

 

 


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