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小鼠雜交瘤細(xì)胞；10-4F10-11培養(yǎng)

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更新時間：2017-02-04 13:31:26瀏覽次數(shù)：118次

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產(chǎn)品簡介

小鼠雜交瘤細(xì)胞；10-4F10-11培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞；10-4F10-11培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性   該細(xì)胞由華中科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院蘇莉教授提交保藏，可用于相關(guān)的基礎(chǔ)研究。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C10
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	小鼠雜交瘤細(xì)胞；10-4F10-11培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
NEURL   環(huán)指蛋白67抗體
NBL1   神經(jīng)母細(xì)胞瘤抑瘤蛋白1抗體
NCF1   嗜中粒細(xì)胞胞漿因子1抗體
NDUFS3   線粒體復(fù)合物NDUFS3蛋白抗體
NRIP   雄激素受體復(fù)合物相關(guān)蛋白/核受體相互作用蛋白抗體
C9orf156   9號染色體開放閱讀框156抗體
NFAT4   核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白3抗體
NANOGP8   干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體
NAIP   神經(jīng)細(xì)胞凋亡抑制蛋白抗體
NLG1   樣蛋白2抗體
NUAK2   SNF1/AMP激酶相關(guān)激酶2抗體
Newcastle disease virus   雞新城疫疫苗（雞瘟4型混合病毒）抗體
NXPH1   神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白1抗體艾膠算盤子Glochidion lanceolarium   Soyacerebroside II   大豆腦苷 II   115074-93-6   C40H75NO9   ≥95%
刺桐Erythrina arborescens   Soyasapogenol B   大豆甾醇B   595-15-3   C30H50O3   ≥97%
大豆 Glycinemax(L.)merr   Soyasaponin Aa   大豆皂苷Aa   117230-33-8   C64H100O31   ≥98%
大豆 Glycinemax(L.)merr   Soyasaponin Bb   大豆皂苷Bb   51330-27-9   C48H78O18   ≥98%
大豆Glycinemax(L.)merr   Soyasaponin Ba   大豆皂苷Ba   114590-20-4   C48H78O19   ≥98%
廣玉蘭Magnolia grandiflora   Spathulenol   *烯醇   6750-60-3   C15H24O   ≥97%
綿棗兒Scilla scilloides   Specioside   黃金樹苷   72514-90-0   C24H28O12   ≥95%
女貞子Fructus Ligustri Lucidi   Specnuezhenide   特女貞苷   39011-92-2   C31H42O17   ≥98%
非洲馬鈴果Voacanga africana   Spegatrine   斯配加春   47326-53-4   C20H25N2O2   ≥95%
狹翅獨活Heracleum stenopterum   Sphondin   6-甲氧基當(dāng)歸素   483-66-9   C12H8O4   ≥97.5%
一文錢Stephania delavayi   Stephanine   千金藤堿   517-63-5   C19H19NO3   ≥98%
吳茱萸Evodia rutaecarpa   Stigmastane-3β,5α,6β-triol   豆甾烷-3,5,6-三醇   20835-91-0   C29H52O3   ≥98%