細(xì)胞名稱 小鼠黑色素瘤細(xì)胞；B16-F1使用說明書
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 B16-F1是B16-F0的亞系。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C27
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
KLF10 TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體
KCNA3 離子通道蛋白Kv1.3抗體
phospho-KLF5(Ser272) 磷酸化KLF5抗體
KLK6 *6抗體
KLK8 *8抗體
KLKB1 血漿*抗體
phospho-EZH2 (Thr487) 磷酸化抑癌蛋白EZH2抗體
KDM5B 組蛋白去甲基化酶JARID1B抗體
Keratan Sulfate 硫酸角質(zhì)素抗體
KRG2 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體
KCNG4 鉀離子通道蛋白G蛋白4抗體
KCTD18 鉀通道多聚體結(jié)構(gòu)域KCTD18抗體
KEAP1 胞質(zhì)接頭蛋白Keap11紫草酸 Lithospermic acid 28831-65-4 538.46 C27H22O12
赤芝酸C Lucidenic acid C 95311-96-9
赤芝酸E Lucidenic acid E 98665-17-9
赤芝酸L
赤芝酸B Lucidenic acid B 95311-95-8
赤芝酸A Chol-8-en-24-oic acid,7-hydroxy-4,4,14-trimethyl-3,11,15-trioxo-, (5a,7b)- 95311-94-7 C27H38O6
靈芝烯酸E Lanosta-8,20(22)-dien-26-oicacid, 7,12-dihydroxy-3,11,15,23-tetraoxo-, (7b,12b,20E)- (9CI) 110241-23-1 C30H40O8
林澤蘭內(nèi)酯D
雞屎藤苷 Paederoside 20547-45-9 446.43 C18H22O11S
雞屎藤苷甲酯 Paederosidic acid methyl ester 122413-01-8
雞屎藤苷酸 Cyclopenta[c]pyran-4-carboxylicacid, 1-(b-D-glucopyranosyloxy)-1,4a,5,7a-tetrahydro-5-hydroxy-7-[[[(methylthio)carbonyl]oxy]methyl]-,(1S,4aS,5S,7aS)- 18842-98-3 C18H24O12S
木通苯乙醇苷B;荷苞花苷B Calceorioside B 105471-98-5 478.44594 C23H26O11
鬧羊花毒素II Grayanotoxane-5,6,10,14,16-pentol,2,3-epoxy-, 6-acetate, (2b,3b,6b,14R)- (9CI) 26116-89-2 410.50116 C22H34O7
鬧羊花毒素III Grayanotoxane-5,6,10,14,16-pentol,2,3-epoxy-, (2b,3b,6b,14R)- 26342-66-5 368.46448 C20H32O6
鬧羊花毒素V (2β,3β,14R)-2,3-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pentol 14-acetate 37720-86-8 410.50116 C22H34O7
蟾毒靈;蟾酥靈 Bufalin 465-21-4 386.52 C24H34O4
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