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小鼠肝癌細胞;H22培養(yǎng)

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地上海

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更新時間:2017-02-04 10:44:02瀏覽次數(shù):297次

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產(chǎn)品簡介

小鼠肝癌細胞;H22培養(yǎng)細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

產(chǎn)品名稱小鼠肝癌細胞;H22培養(yǎng)
貨期3-5天
發(fā)貨地上海

細胞名稱  小鼠肝癌細胞;H22培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性  懸浮生長
特征特性   該細胞系分離自小鼠腹水,由大連醫(yī)*建立。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  C15
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  同工酶鑒定
染色體  
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點: 
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
KIF3A    驅(qū)動蛋白家族蛋白3抗體
KLC1    驅(qū)動蛋白2抗體
KIAA1522    KIAA1522蛋白抗體
KCTD5    鉀離子通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體
KLMW Kininogen    高分子量激肽原重鏈抗體
KCTD11    鉀通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體
KLHL26    Kelch樣蛋白26抗體
KDEL (ER Marker)    賴氨酸,天冬氨酸,*,*相關(guān)序列抗體
KLHL10    Kelch樣蛋白10抗體
KLHL11    Kelch樣蛋白11抗體
KLHL3    Kelch樣蛋白3抗體
KLHL14    Kelch樣蛋白14抗體
KLHL31    Kelch樣蛋白31抗體
KLHL32    Kelch樣蛋白32抗體
KCNA5    鉀電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體苦玄參苷IB                
白術(shù)內(nèi)酯I;蒼術(shù)內(nèi)酯I    Atractylenolide-1    73069-13-3    230.3    C15H18O2
安格洛苷C;安格洛甙C    Angoroside C    115909-22-3    784.75    C36H48O19
白術(shù)內(nèi)酯II;蒼術(shù)內(nèi)酯II    2-Atractylenolide    73069-14-4    232.32    C15H20O2
蒼術(shù)素    Atractylodin    55290-63-6    182.22    C13H10O
木蘭花堿    Magnoflorine    2191-49-5        
澳洲茄胺;澳州茄胺    solasodine    126-17-0    413.64    C27H43NO2
麥角甾醇;麥角固醇    Ergosterol    57-87-4    396.65    C28H44O
靈芝酸D    Ganoderic acid D    108340-60-9    514.65028    C30H42O7
靈芝酸A    GANODERIC ACID A    81907-62-2    514.65028    C30H42O7
靈芝烯酸D    Ganoderenic acid D    100665-43-8    512.6344    C30H40O7
靈芝酸G    Ganoderic acid G    98665-22-6    532.66556    C30H44O8
靈芝酸F    Ganoderic acid E    98665-14-6    512.6344    C30H40O7
赤芝酸LM1;赤芝酸N    Lucidenic acid LM1;Lucidenic acid N    364622-33-3        

 

 


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