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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司


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抗SARS病毒N蛋白小鼠雜交瘤細(xì)胞；12E9培養(yǎng)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地上海

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更新時(shí)間：2017-01-24 11:27:39瀏覽次數(shù)：262次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

抗SARS病毒N蛋白小鼠雜交瘤細(xì)胞；12E9培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱抗SARS病毒N蛋白小鼠雜交瘤細(xì)胞；12E9培養(yǎng)
貨期3－5天
發(fā)貨地上海

細(xì)胞名稱  抗SARS病毒N蛋白小鼠雜交瘤細(xì)胞；12E9培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   可產(chǎn)生單克隆抗體，抗原為SARS病毒N蛋白。  
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   保持細(xì)胞密度在1×105～1×106 cells/ml之間，每周換液2～3次
傳代情況  不詳
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  陰性
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
FNBP1L    FNBP1L蛋白抗體
FOG2    GATA結(jié)合蛋白2伴侶蛋白抗體
Frizzled 9    CD349抗體
FISH    FISH蛋白抗體
FADS2    脂肪酸脫氫酶2抗體
FDFT1    法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1/鯊烯合成酶抗體
FOXD3    叉頭蛋白D3抗體
FOXB1    叉頭蛋白B1抗體
Fibrinogen beta chain    纖維蛋白原β鏈抗體
FAM120C    構(gòu)成激活過氧化酶活化增生受體γ樣蛋白2抗體
FMNL1    成蛋白相關(guān)蛋白1抗體
FAM89B    腫瘤病毒受體同源蛋白抗體
FGF11    成纖維細(xì)胞生長因子11抗體1% Dextrose Broth Medium        
UBA培養(yǎng)基    500g    用于啤酒檢驗(yàn)
商業(yè)無菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基        
錳鹽營養(yǎng)瓊脂    250g    用于嗜熱需氧芽孢桿菌的檢驗(yàn)
Mn2+Nutrient Agar        
卵黃瓊脂基礎(chǔ)    250g    加入卵黃，用于厭氧梭狀芽孢桿菌的分離培養(yǎng)
Egg Yolk Agar Base        
酸性肉湯    250g    用于酸性缺罐頭食品商業(yè)無菌檢驗(yàn)
Acid Borth        
普通肉湯培養(yǎng)基    250g    用于*的增菌培養(yǎng)
Broth Medium        
0.5%*    250g    用于環(huán)氧乙烷消毒和電離輻射消毒過程監(jiān)測(cè)指示菌（枯草桿菌黑色變種芽孢及短小桿菌芽孢）的培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
0.5% Dextrose Broth        
 一次性衛(wèi)生用品檢驗(yàn)檢驗(yàn)培養(yǎng)基        

 

 


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