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tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞（B類(lèi)）；Pan02-CAG-tTA-4B3復(fù)蘇

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tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞（B類(lèi)）；Pan02-CAG-tTA-4B3復(fù)蘇現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，同時(shí)我司為您提供價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明，歡迎前來(lái)選購(gòu)！

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱(chēng)	生長(zhǎng)特性	發(fā)貨地	貨期
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞（B類(lèi)）；Pan02-CAG-tTA-4B3復(fù)蘇	貼壁生長(zhǎng)	上海	3－5天

細(xì)胞名稱(chēng) tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞（B類(lèi)）；Pan02-CAG-tTA-4B3復(fù)蘇
形態(tài)特性   多角
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性   轉(zhuǎn)染pCAG-tTA質(zhì)粒，經(jīng)2.0ug/ml puromycin篩選，為T(mén)et-off穩(wěn)定調(diào)控細(xì)胞系，受*Dox調(diào)控倍數(shù)在20~50倍。細(xì)胞倍增時(shí)間為24小時(shí)。
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  5%FBS + 2.0ug/ml puromycin
傳代方法   1:4傳代，2~3天傳代一次。
傳代情況
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR   -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類(lèi)

來(lái)源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量*，使*的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
氯化鈉*肉湯基礎(chǔ)(SCPB)   250g   用于副溶血性弧菌選擇性增菌培養(yǎng)，用前應(yīng)無(wú)菌加入*（SN標(biāo)準(zhǔn)）
Sodium Chloride Polymyxin Broth Base
我妻氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)   250g   用于副溶血性弧菌神奈川現(xiàn)象試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)、SN）
Wagstsuma Agar Base
60g/L氯化鈉蛋白胨肉湯   250g   用于副溶血性弧菌的前增菌培養(yǎng)（SN標(biāo)準(zhǔn)）
60g%/L NaCl Peptone Water
氯化鈉三糖鐵   250g   用于副溶血性弧菌的生化反應(yīng)篩選（SN標(biāo)準(zhǔn)）
NaCl Triple Sugar Iron Agar
胰胨大豆瓊脂斜面（TSA）   250g   培養(yǎng)副溶血性弧菌，做細(xì)胞色素氧化酶實(shí)驗(yàn)（SN標(biāo)準(zhǔn)）
Tryptic Soy Agar
42℃生長(zhǎng)培養(yǎng)基   250g   用于副溶血性弧菌42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)（SN標(biāo)準(zhǔn)）EGF   小鼠抗表皮生長(zhǎng)因子抗體
EGF   抗表皮生長(zhǎng)因子抗體
Eph receptor A2+A3+A4   內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白*激酶A2+A3+A4抗體
phospho-Eph receptor A2+A3+A4 (Tyr588 + Tyr596)   磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白*激酶A2+A3+A4抗體
phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779)   磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白*激酶A3+A4+A5抗體
Etv5   轉(zhuǎn)錄因子Ets差異基因5抗體
E-Selectin   E選擇素抗體
heatstable enterotoxin 1 [Escherichia coli]   大腸桿菌耐熱腸毒素抗體
E1 Ubiquitin Activating Enzyme   泛素激活酶E1抗體
EGFR   表皮生長(zhǎng)因子受體抗體
ETS1   Ets轉(zhuǎn)錄因子家族e(cuò)ts1抗體
EBF1   早期B淋巴細(xì)胞因子1抗體
EDNRA   內(nèi)皮素受體A抗體
EGFR   表皮生長(zhǎng)因子受體抗體
EGFR   表皮生長(zhǎng)因子受體抗體