細胞名稱 人肝癌細胞；PLC/PRF/5使用說明書
形態(tài)特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 表達乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，細胞分泌HBsAg
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 PN5
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR AMEL:X,X；CSF1PO:10,10；D12S391:15,20；D13S317:11,12；D16S539:13,13；D18S51:17,17；D19S433:11,13；D21S11:30,33.2；D2S1338:19,22；D2S441:12,14；D3S1358:15,15；D5S818:12,12；D6S1043:13,21；D7S820:9,11；D8S1179:13,16；FGA:19.2,25；Penta D:6,10；Penta E:10,16；TH01:8,8；TPOX:8,
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
麥康凱瓊脂3號 250 用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)
堿性瓊脂平板 250 用于分離霍亂弧菌
堿性膽鹽瓊脂 250 用于分離霍亂弧菌
酸氫鈉瓊脂基礎 250 用于炭疽桿菌的莢膜培養(yǎng)
指示選擇性培養(yǎng)基基礎 250 用于炭疽桿菌的分離鑒別
PLET 瓊脂基礎 250 用于炭疽桿菌的分離鑒別
戊烷脒 50mg 加入戊烷脒多粘菌素瓊脂
炭疽桿菌疫苗 50人份/5支 炭疽桿菌檢測用配套試劑
炭疽桿菌沉淀血清 1ml 炭疽桿菌檢測用配套試劑
炭疽桿菌噬菌體 1ml 炭疽桿菌檢測用配套試劑
炭疽桿菌診斷抗原 1ml 炭疽桿菌檢測用配套試劑
*敏感紙片 20片 炭疽桿菌檢測用配套試劑 CREG1 E1A激活基因刺激蛋白1抗體
C2orf42 2號染色體開放閱讀框42抗體
Classical swine fever virus 豬瘟病毒抗體
C3orf54 3號染色體開放閱讀框54抗體
CLLD6 慢淋巴細胞白血病缺失基因6蛋白抗體
C13orf38 13號染色體開放閱讀框38抗體
C14ORF140 14號染色體開放閱讀框140抗體
CHAC2 陽離子轉運調節(jié)樣蛋白2抗體
C15orf62 15號染色體開放閱讀框62抗體
C15orf41 15號染色體開放閱讀框41抗體
CNGA2 環(huán)核苷酸陽離子通道蛋白α2抗體
