人類淋巴母細胞瘤細胞；HLCL 9B10使用說明書

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更新時間：2017-01-23 11:21:14瀏覽次數(shù)：173次

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產(chǎn)品簡介

人類淋巴母細胞瘤細胞；HLCL 9B10使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 人類淋巴母細胞瘤細胞；HLCL 9B10使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性懸浮生長
特征特性   該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限未定

產(chǎn)品名稱	人類淋巴母細胞瘤細胞；HLCL 9B10使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
c-Abl   非受體*激酶c-Abl抗體
CCDC152   卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白152抗體
CHPT1   甘油二酯*磷酸轉(zhuǎn)移酶抗體
Chromogranin B   嗜鉻粒素B抗體
Cullin 5   血管加壓素激活鈣啟動受體蛋白1抗體
Cyp2-j3   細胞色素P450Ⅱj3抗體
CLCA4   鈣激活氯離子通道4抗體
CDK6   周期素依賴激酶6抗體
CDK7   周期素依賴激酶7抗體
CDK8   周期素依賴激酶8抗體
CDKN1C   周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗體
Chondrocalcin   Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體
c-fos   c-fos抗體
Chromogranin A   嗜鉻粒素A抗體
CGRP   CGRP降鈣素基因相關(guān)肽抗體   12154   酵母氮源基礎(chǔ)（YNB）   250g/瓶   用于通過碳源的利用對酵母菌進行分類
   11006   含鐵牛奶培養(yǎng)基   250g/瓶   用于產(chǎn)氣莢膜梭菌暴烈發(fā)酵試驗
   11008   梭菌*   250g/瓶   用于梭菌的增菌培養(yǎng)
   11014   產(chǎn)芽孢肉湯   250g/瓶   用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的芽孢試驗
   11015   多價蛋白胨-酵母膏（PY）培養(yǎng)基   250g/瓶   用于產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)
   11017   乳糖-明膠培養(yǎng)基   250g/瓶   用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的乳糖、明膠生化試驗
   11020   胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉湯（TPGYT 基礎(chǔ)）   250g/瓶   用于肉毒梭菌增菌培養(yǎng)，需添加1:250 * 51002
   11021   厭氧卵黃瓊脂基礎(chǔ)   250g/瓶   用于肉毒梭菌增菌分離，每 100ml培養(yǎng)基中添加 3 支 21001
   11022   明膠磷酸鹽緩沖液   250g/瓶   用于肉毒梭菌和肉毒毒素檢樣的制備
   11023   TSN 瓊脂   250g/瓶   用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的選擇性分離和計數(shù)
   11024   TBB 培養(yǎng)基   250g/瓶   用于乳酪產(chǎn)品中梭菌的計數(shù)
   11027   強化梭菌鑒別瓊脂（DRCA）   250g/瓶   用于食品和其它物質(zhì)中梭菌的計數(shù)和培養(yǎng)

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