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人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；IMR-32使用說明書

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更新時間：2017-01-21 14:38:02瀏覽次數(shù)：220次

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產(chǎn)品簡介

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；IMR-32使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱	人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；IMR-32使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞；IMR-32使用說明書
形態(tài)特性   神經(jīng)母細(xì)胞,成纖維細(xì)胞
生長特性貼壁生長
特征特性   IMR-32細(xì)胞是1967年四月 W.W. Nichols, J. Lee and S. Dwight從一位13個月大的男嬰下腹部腫瘤中分離建株。診斷認(rèn)為是神經(jīng)母細(xì)胞瘤，并有少部分區(qū)域的器質(zhì)性分化。包括兩種類型的細(xì)胞。主要的是小的神經(jīng)母細(xì)胞樣的細(xì)胞。另一種是大的透明成纖維細(xì)胞。細(xì)胞提交到ATCC時已經(jīng)傳到第36代。已經(jīng)證明細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)到80代以上。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3-4天長滿。
傳代情況 P(52+5)
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測陰性
STR   Amelogenin:X,Y；CSF1PO:11,12；D13S317:9；D16S539:8；D18S51:12,15；D19S433:14,15；D21S11:30,31；D2S1338:23,24；D3S1358:16；D5S818:11,12；D7S820:9,10；D8S1179:13；FGA:21,24；TH01:7,9.3；TPOX:11；vWA:15
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
SERPINB3   英文名稱：   *蛋白酶抑制劑B3抗體   ?0.2ml
SNF1LK2   英文名稱：   */*蛋白激酶SIK2抗體   ?0.2ml
Septin 3   英文名稱：   神經(jīng)元特異蛋白3抗體   ?0.2ml
pig cholerae salmonella   英文名稱：   豬霍亂沙門氏菌抗體   ?0.2ml
PIG54   英文名稱：   細(xì)胞增殖誘導(dǎo)蛋白54抗體   ?0.1ml
Salmonella   英文名稱：   沙門氏菌抗體（多型）   ?0.2ml
Salmonella typhimurium   英文名稱：   鼠傷*   ?0.2ml
Salmonella paratyphi a   英文名稱：   *抗體   ?0.2ml
SRRM1   英文名稱：   */*相關(guān)核基質(zhì)蛋白1抗體   ?0.2ml
SRRM2   英文名稱：   */*相關(guān)核基質(zhì)蛋白2抗體   ?0.1ml3%氯化鈉溶液   25048   250g   用于副溶血性弧菌的血清學(xué)檢測。（GB/T 4789.7-2008）
我妻氏血瓊脂   25047   250g   用于副溶血性弧菌的神奈川試驗(yàn)。（SN0173-2010和GB/T4789.7-2008）
3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂   25043   250g   用于副溶血性弧菌的生長試驗(yàn)。（SN0173-2010和GB/T4789.7-2008）
堿性瓊脂   25040   250g   用于霍亂弧菌及其它弧菌的培養(yǎng)。
四號瓊脂   25030   250g   用于霍亂弧菌的選擇性分離培養(yǎng)。
TCBS瓊脂   25020   250g   用于腸道致病性弧菌特別是霍亂弧菌和副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB/T 4789.7-2008，SN0173-20...
緩沖-甘油氯化鈉溶液   25017   250g   用于樣品的保存。（GB 4789.13-2010）
3%氯化鈉堿性蛋白胨水   25015   250g   用于副溶血性弧菌增菌培養(yǎng)。
堿性蛋白胨水   25010   250g   用于嗜堿性細(xì)菌特別是弧菌的選擇性增菌培養(yǎng)。(SN/T1022-2010)
SCDLP液體培養(yǎng)基   27010   250g   用于疏水性化妝品樣品處理及化妝品和一次性使用衛(wèi)生用品增菌培養(yǎng)(化妝品衛(wèi)生規(guī)范微生物檢驗(yàn)方法2...
營養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基）   22020   250g   用于細(xì)菌總數(shù)測定、保存菌種及純培養(yǎng)，也可用于消毒效果測定（GB/T4789.28－2003 中4.7 ，GB/T47...
含鐵牛奶培養(yǎng)基   28035   250g   用于飲用天然礦泉水中產(chǎn)氣莢膜梭菌的測定。（GB/T 8538-2008）
亞硫酸鹽-多粘菌素-*瓊脂基礎(chǔ)(SPS)   28031   250g   用于食品和礦泉水中產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)和計數(shù)(GB/T 8538-2008，GB/T4789.28-2003中4.69，GB/...