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人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞

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更新時間：2017-01-21 14:25:45瀏覽次數(shù)：362次

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產(chǎn)品簡介

人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞；CCRF-CEM [CCRF CEM]培養(yǎng)細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞；CCRF-CEM [CCRF CEM]培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性懸浮生長
特征特性   G.E. Foley 等人建立了類淋巴母細胞細胞株CCRF-CEM。細胞是1964年11月從一位四歲白人女性急性淋巴細胞白血病患者的外周血白血球衣中得到。此細胞系從香港收集而來。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法   1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類

產(chǎn)品名稱	人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞；CCRF-CEM [CCRF CEM]培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

；CCRF-CEM [CCRF CEM]培養(yǎng)復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
；CCRF-CEM [CCRF CEM]培養(yǎng)操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
5T4   英文名稱：   滋養(yǎng)層細胞糖蛋白5T4抗體   ?0.2ml
phospho-STAT1 (Tyr701)   英文名稱：   磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體   ?0.1ml
phospho-STAT3 (Tyr705)   英文名稱：   磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體   ?0.1ml
phospho-STAT6 (Tyr641)   英文名稱：   磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體   ?0.1ml
SIGLEC14   英文名稱：   唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素14抗體   ?0.2ml
Secretin receptor   英文名稱：   分泌素受體抗體   ?0.2ml
beta Sarcoglycan   英文名稱：   肌聚多糖-β抗體   ?0.1ml
Phospho-Syk (Tyr323)   英文名稱：   磷酸化非受體型*蛋白激酶抗體   ?0.1ml
Phospho-Syk (Tyr525 + Tyr526)   英文名稱：   磷酸化非受體型*蛋白激酶抗體   ?0.1ml
Rat secretory IgA   英文名稱：   分泌型免疫球蛋白A抗體   ?0.2ml
SKP2   英文名稱：   細胞S期激酶相關(guān)蛋白2抗體   ?0.1ml新生霉素A   Novobiocin   2mg/支*5   添加于100ml mEC肉湯和mTSB肉湯中用于0157選擇性增菌
新生霉素   Novobiocin Sodium Salt   1.5mg/支*5   使用前，每支加入100mlHB4153中
心浸液瓊脂   Heart Infusion Agar   250   用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求高的微生物 (ACUMEDIA方法)
現(xiàn)隱肉湯   Presence Absence Broth   250   用于水中大腸菌群計數(shù)(US-EPA方法)
細菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基   Total Genes Chromogenic Medium    250g   用于快速、準(zhǔn)確檢測細菌總數(shù)，培養(yǎng)24小時，細菌顯紅色
西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂    Simmons Citrate Agar   250   用于腸道菌的檸檬酸鹽利用試驗(GB標(biāo)準(zhǔn))
我妻氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)    Wagstsuma Agar Base   250   用于神奈川現(xiàn)象試驗（SN標(biāo)準(zhǔn)）
衛(wèi)矛醇半固體瓊脂     Dulcitol Semisolid Agar   10   生化培養(yǎng)基，用于細菌衛(wèi)予醇發(fā)；CCRF-CEM [CCRF CEM]培養(yǎng)酵試驗（SN標(biāo)準(zhǔn)）
兔血漿     Rabbit Plasma   0.5ml*20   用于*凝固酶試驗
四環(huán)素檢定瓊脂     Tetracyline Examination Agar   250   用于四環(huán)素殘留的微生物學(xué)檢定(SN標(biāo)準(zhǔn))