Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞；NCI-H1975-Cas9-596復(fù)蘇來(lái)源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。

細(xì)胞名稱(chēng)  
形態(tài)特性   上皮樣
生長(zhǎng)特性  貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使NCI-H1975細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法   1:3~1:6傳代；每周換液2~3次。
傳代情況  C3
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  培養(yǎng)法（-）
STR   Amelogenin：x,x；CSF1PO：12,12；D12S391：17,17；D13S317：10,13；D16S539：9,12；D18S51：13,13；D19S433：15,15.2；D21S11：28,28；D2S1338：17,17；D3S1358：14,15；D5S818：11,12；D6S1043：12,12；D7S820：8,8；D8S1179：13,13；FGA：21,24；Penta E：12,12；TH01：7,7；TPOX：8,11；vWA：18,18；
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類(lèi)

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量*，使*的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
xSenataxin    英文名稱(chēng)：    肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體    ?0.2ml
SLC39A7    英文名稱(chēng)：    轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族39成員7抗體    ?0.2ml
SLC4A4 variant A    英文名稱(chēng)：    *協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4突變型抗體    ?0.1ml
phospho-SynGAP (Ser836)    英文名稱(chēng)：    磷酸化認(rèn)知缺陷突觸相關(guān)蛋白SynGAP抗體    ?0.1ml
Syndecan 3    英文名稱(chēng)：    Syndecan 3蛋白抗體    ?0.1ml
SP-C Propeptide    英文名稱(chēng)：    肺表面活蛋白C前體肽抗體    ?0.1ml
Phospho-Smad1 (Ser463)     英文名稱(chēng)：    磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體    ?0.1ml
Phospho-Smad1 (Ser465)    英文名稱(chēng)：    磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體    ?0.1ml
phospho-Smad3 (Ser423)    英文名稱(chēng)：    磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體    ?0.1ml
Syntrophin-1    英文名稱(chēng)：    神經(jīng)肌肉接頭蛋白SNTA1抗體    ?0.2ml
Syntrophin-2    英文名稱(chēng)：    互養(yǎng)蛋白2抗體    ?0.1ml
Syntrophin-3    英文名稱(chēng)：    互養(yǎng)蛋白3抗體    ?0.1ml
Syntrophin-1+2+3    英文名稱(chēng)：    互養(yǎng)蛋白1,2,3抗體    ?0.1ml
Sumo 2    英文名稱(chēng)：    泛素樣蛋白Sumo2抗體    ?0.2mlAnti-TM/FITC  熒光素標(biāo)記血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TM/Biotin  *化血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TNFSF4/CD252/FITC  熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子配體超家族成員4抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TNFSF18/GITR Ligand/FITC  熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子配體超家族成員18抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TNF- Alpha /HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記腫瘤壞死因子抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TNF- Alpha /HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人腫瘤壞死因子-α單克隆抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TRAF1/Biotin   *化腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1抗體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TRAF1/FITC  熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TRAF2/TNF-R2 /FITC  熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子2抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TRAF3/CD40bp /FITC  熒光素標(biāo)記CD40結(jié)合蛋白/CD40受體相關(guān)因子1抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TRAF6 /FITC  熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml