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人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5培養(yǎng)

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產(chǎn)品簡介

人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5培養(yǎng)，細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱	人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5培養(yǎng)
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   MRC-5細(xì)胞系來自14周齡男性胎兒的正常肺組織，該細(xì)胞老化前能傳代42~46個(gè)倍增時(shí)間。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%
傳代方法   1：2-1：4
傳代情況 P33
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%牛血清+10%DMSO
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR   Amelogenin:X,Y；CSF1PO:11,12；D13S317:11,14；D16S539:9,11；D18S51:15,21；D21S11:31.2；D3S1358:15,17；D5S818:11,12；D7S820:10,11；D8S1179:13；FGA:21,23；PentaD:12.；PentaE:12,16；TH01:8；TPOX:8；vWA:15
同工酶人B,NP,G6PG,MD,AST
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
MMP-10(Human Matrix metalloproteinase 10) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶10   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MMP-1(Human Matrix metalloproteinase 1) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Flt3(Human FMS-like tyrosine kinase 3) ELISA Kit 人FMS樣*激酶3   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Flt-3L(Human FMS-like tyrosine kinase 3 ligand) ELISA Kit 人FMS樣*激酶3配體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ACE(Human Angiotensin converting enzyme) ELISA Kit 人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
AMBP(Human alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) ELISA Kit 人α1微球蛋白/bikunin前體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Human podocin ELISA Kit 人Podocin   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Human Nephrin ELISA Kit 人腎蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Alpha1-MG(Human Alpha1-microglobulin) ELISA Kit 人α1微球蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ALB(Human microalbunminuria) ELISA Kit 人尿微量白蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
AAA(Human Anti-adrenocortical antibody) ELISA Kit 人抗腎上腺皮質(zhì)抗體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
RANA(Human rheumatoid arthritis associated nuclear artigen) ELISA Kit 人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48TGlyt1   英文名稱：   *轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體   ?0.2ml
Gsh1   英文名稱：   生長激素釋放激素同源盒蛋白1抗體   ?0.1ml
GYPB   英文名稱：   血型糖蛋白δ抗體   ?0.2ml
GluR1   英文名稱：   *受體1抗體   ?0.1ml
OR10A5   英文名稱：   味覺受體蛋白家族10亞基5抗體   ?0.2ml
phospho-GluR1 (Ser863)   英文名稱：   磷酸化*受體1抗體   ?0.1ml
phospho-GluR1 (Ser645)   英文名稱：   磷酸化*受體1抗體   ?0.1ml
phospho-GluR1(Ser831)   英文名稱：   磷酸化*受體1抗體   ?0.1ml
GPR48   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體48抗體   ?0.1ml
GABRA2   英文名稱：   G氨基丁酸A型受體α2/GABAA Rα2抗體   ?0.2ml
GABRA4   英文名稱：   G氨基丁酸A型受體α4/GABAA Rα4抗體   ?0.2ml