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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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所 在 地上海市
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更新時(shí)間:2017-01-19 17:07:44瀏覽次數(shù):530次
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人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17使用說(shuō)明書(shū),細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基,這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。
【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
產(chǎn)品名稱 | 人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17使用說(shuō)明書(shū) |
貨期 | 3-5天 |
發(fā)貨地 | 上海 |
細(xì)胞名稱 人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17使用說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 來(lái)自于4周齡女孩胚胎,1975年中國(guó)醫(yī)學(xué)*昆明醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所建立;可作為轉(zhuǎn)染宿主,用于肺損傷或分化的研究。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 新生牛血清,10%;水解乳蛋白,10%
傳代方法 1:2-1:4
傳代情況 P10
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%牛血清+10%DMSO
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X; D7S820:9,11;CSF1PO:12;D13S317:9,12;D16S539:11,13;D18S51:14,17;D21S11:29,30;D3S1358:16;D5S818:13;D8S1179:11,13;FGA:20,27;PentaD:9,13;PentaE:12,15;TH01:7;TPOX:10,11;vWA:14,18
同工酶 人B,NP,G8PG,MD,AST
染色體
使用權(quán)限 A類
復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟:
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
eNOS(Human Endothelial nitric oxide synthase) ELISA Kit 人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
HO-1(Human heme oxygenase 1) ELISA Kit 人血紅素氧合酶1 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
iNOS(Human inducible nitric oxide synthase) ELISA KIT 人誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
PL-A2(Human Phospholipidase A2) ELISA Kit 人磷脂酶A2 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
NOS(Human nitric oxide synthase) ELISA Kit 人一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
TE(Human omerase) ELISA Kit 人端粒酶 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶5 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
MMP-4(Human matrix metalloproteinase 4) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶4 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
MMP-9/Gelatinase B(Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
NSE(Human Neuron-specific enolase) ELISA Kit 人神經(jīng)特異烯醇化酶 Multi-class antibodies 規(guī)格: 48T
CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme) ELISA Kit 人肌酸激酶同工酶MB Multi-class antibodies 規(guī)格: 48TGPR124 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體124抗體(腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記物) ?0.1ml
Galectin 1 英文名稱: 半乳糖凝集素1抗體 ?0.1ml
GANAB 英文名稱: α葡萄糖苷酶2抗體 ?0.1ml
Galectin 7 英文名稱: 半乳糖凝集素7抗體 ?0.2ml
GCDFP15 英文名稱: 特異囊腫病液體蛋白15抗體 ?0.2ml
GCET1 英文名稱: B淋巴細(xì)胞生發(fā)中心相關(guān)蛋白抗體 ?0.2ml
GASC1 英文名稱: 鱗狀細(xì)胞癌增強(qiáng)蛋白1抗體 ?0.1ml
G alpha gust 英文名稱: Gα gust抗體 ?0.2ml
GLS1 英文名稱: *酶抗體 ?0.2ml
GCMA 英文名稱: 絨毛膜特異轉(zhuǎn)錄因子GCMa抗體 ?0.1ml
GBP5 英文名稱: G蛋白結(jié)合蛋白5抗體 ?0.2ml
Cancer/testis antigen family 4 member 7 英文名稱: 腫瘤/抗原家族4亞型7抗體 ?0.2ml
GFR alpha 3 英文名稱: GDNF家族受體α3抗體 GFR α3 ?0.2ml
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