elisa酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
染色單體或染色體的無(wú)著絲點(diǎn)斷片，或因紡錘體受損而丟失的整個(gè)染色體，在細(xì)胞分裂后期，仍然在細(xì)胞質(zhì)中。末期之后，單獨(dú)形成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則的次核，被包含在子細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。大小應(yīng)為主核的1/20～1/5。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣。微核率是和用藥的劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān)，所以可用簡(jiǎn)易的、快速、靈敏的微核計(jì)數(shù)來(lái)代替繁雜的畸變?nèi)旧w計(jì)數(shù)。Matter 和Schmid建立的微核測(cè)試是一種比較理想的方法，目前國(guó)內(nèi)外已把微核測(cè)試用于輻射損傷、化學(xué)誘變劑、新藥試驗(yàn)、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。
嗜多染紅細(xì)胞是分裂后期的紅細(xì)胞由幼年發(fā)展為成熟紅細(xì)胞的一個(gè)階段，此時(shí)紅細(xì)胞的主核已排出，因胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，Giemsa染色呈灰藍(lán)色，成熟紅細(xì)胞的核糖體已消失，被染成淡橘紅色。骨髓中嗜多染紅細(xì)胞數(shù)量充足，由于無(wú)核，極易觀察到微核，因此，骨髓中嗜多染紅細(xì)胞成為微核試驗(yàn)的細(xì)胞群。
實(shí)驗(yàn)方法與步驟
（1）*處理：取骨髓前24h先給小鼠腹腔注入*，注射劑量為100mg／kg動(dòng)物體重。
（2）取骨髓：用損傷脊髓法處死小鼠，然后用剪刀剪開(kāi)大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨，用一小塊紗布來(lái)回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭，然后用注射器吸取5ml生理鹽水，插入股骨一端，將骨髓細(xì)胞沖洗至10ml的離心管中?？芍貜?fù)沖洗多次，直至骨髓腔呈白色為止。
（3）離心處理：將所獲得的細(xì)胞懸浮液以 1000rpm離心10min，吸去上清液，在沉淀物中加入2滴滅活的小牛血清，制成細(xì)胞懸液。
（4）涂片：滴一滴懸液于載玻片一端，按常規(guī)方法涂片，在空氣中晾干。
（5）固定：將晾干的載玻片放入甲醇固定液中10min，取出晾干。
（6）染色：將制片平放在玻璃板上，用1∶9∶10的 Giemsa∶PBS∶瑞氏染液，染色15min，流水沖洗后晾干即可鏡檢。
（7）觀察：嗜多染紅細(xì)胞為年幼紅細(xì)胞，呈灰藍(lán)色，略大于紅細(xì)胞（紅色），微核多呈圓形和橢圓形，呈藍(lán)紫色或紫紅色（圖13-3）。
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