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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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閱讀:192發(fā)布時(shí)間:2017-3-27
胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK)進(jìn)口elisa試劑盒質(zhì)量要求:
1) 真實(shí)性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過n末端氨基酸序列分析;必要時(shí)應(yīng)用sds-page,rp-hplc和質(zhì)譜(ms)檢測(cè)其真實(shí)性。
2) 純度:應(yīng)用sds-page和rp-hplc方法分析產(chǎn)品純度。
3) 生物活性:進(jìn)行相應(yīng)的體外(invitro)或體內(nèi)(invivo)活性檢測(cè)。
4) 蛋白含量:通過紫外光譜分析,sds-page電泳檢測(cè);必要時(shí)應(yīng)用hplc定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。
5) 內(nèi)毒素:kineticlal法檢測(cè)內(nèi)毒素。
6) 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。
操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
8 ng/L 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4 ng/L 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2 ng/L 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1 ng/L 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.5 ng/L 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后
再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸
及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)
5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后
15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)進(jìn)口elisa試劑盒,48T/96T
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人*(SS)ELISA Kit,48T/96T
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