進(jìn)口elisa試劑盒sAc/Ds雙系統(tǒng)法克隆基因的原因及步驟
1)將sAc和Ds分別與T-DNA連接，在農(nóng)桿菌的幫助下分別轉(zhuǎn)入植物中，獲得sAc的轉(zhuǎn)化植株和Ds的轉(zhuǎn)化植株。 2)將sAc轉(zhuǎn)化株與Ds轉(zhuǎn)化株雜交，挑選同時(shí)含有sAc和Ds的子一代植株。
3)雜合植株中，Ds在sAc產(chǎn)生的轉(zhuǎn)位酶幫助下轉(zhuǎn)座，引起某個(gè)基因突變，從而產(chǎn)生表型突變株。
4)通過(guò)突變植株的自交和回交，選擇僅含有Ds而無(wú)sAc的植株，從而使變異得到穩(wěn)定。建立對(duì)應(yīng)于變異株的基因文庫(kù)或cDNA文庫(kù)。
5)用IPCR的方法擴(kuò)增與Ds相鄰的DNA片段，利用此片段作探針直接從基因文庫(kù)或cDNA文庫(kù)中篩選對(duì)應(yīng)的基因克隆，通過(guò)DNA測(cè)序和比較了解該基因的特征。
6)穩(wěn)定的變異株再與sAc轉(zhuǎn)化株雜交，使得Ds再次轉(zhuǎn)位，使突變的基因得到恢復(fù)，從而得到回復(fù)突變株，用于檢驗(yàn)所得到的基因是否對(duì)應(yīng)于變異的基因。
進(jìn)口elisa試劑盒sAc/Ds雙系統(tǒng)法的應(yīng)用
用sAc/Ds雙系統(tǒng)法克隆基因，容易得到回復(fù)突變株和容易產(chǎn)生再次突變克隆其它基因，與T-DNA做基因標(biāo)簽相比省去了再次轉(zhuǎn)化的繁瑣程序，為克隆基因的工作帶來(lái)了極大方便。
理論上用sAc/Ds雙系統(tǒng)法克隆基因如果有足夠的轉(zhuǎn)化株，能克隆到任何一個(gè)基因，另外這種方法還可用于定點(diǎn)突變。如果對(duì)某一基因我們不知道它的表達(dá)產(chǎn)物，也不知道它何時(shí)在何部位表達(dá)，sAc/Ds雙系統(tǒng)法是一種較好的克隆基因的方法，該方法以其*的優(yōu)點(diǎn)在克隆基因工作中將得到更廣泛的應(yīng)用。
H6878-25G 8-Hydroxyquinoline 8-羥基喹啉 148-24-3
T5500-50G 2-Thiobarbituric acid 2-硫代巴比妥酸 504-17-6
T5500-10G 2-Thiobarbituric acid 2-硫代巴比妥酸 504-17-6
G8772-10G Glass beads,acid-washed 玻璃珠 /
SL9010-250ml Folin-Ciocalteu''''s Phenol Reagent 福林酚 /
D7299-10G 2`4-D 2,4-二氯苯氧乙酸 94-75-7
X0819-5G Xylene Cyanol FF 二甲苯青FF 2650-17-1
X0819-1G Xylene Cyanol FF 二甲苯青FF 2650-17-1
T0765-1G TTC 2,3,5-氯化三苯基四氮唑 298-96-4
T0765-5G TTC 2,3,5-氯化三苯基四氮唑 298-96-4
ER0201 Cfr42 I
ER1881 HpyF3I
ER1791 SsiI
ER1661 FspAI
ER1551 Psu I
ER1501 Bfu I
ER1452 BseX I
ER1371 Sch I
SM1293 MassRuler Express Reverse DNA Ladder Mix, ready-to-use
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