Pronase E 鏈霉蛋白.*酶E

關(guān)鍵詞：Protease from Streptomyces griseus，灰色鏈霉菌，蛋白酶混合物，混合蛋白酶，Actinase E，Pronase E，EC No: 3.4.24.31，CAS NO：9036-06-0

產(chǎn)品描述

鏈霉蛋白.*酶E（Pronase E），來源于灰色鏈霉菌的一組蛋白酶（Protease from Streptomyces griseus），至少包含細(xì)胞外絲安酸蛋白酶在內(nèi)的三種蛋白酶活性。通常情況，絲安酸蛋白酶具廣譜的底物特異性，通過分子上一個(gè)天冬氨酸，一個(gè)組安酸，和一個(gè)絲安酸組成的活性位點(diǎn)來調(diào)控。本酶選擇性偏好水解谷安酸或天冬氨酸羧基形成的肽鍵，常見的絲安酸活性位點(diǎn)抑制劑可抑制其活性，如PMSF和DFP。鏈霉蛋白.*酶E（Pronase E），還至少包含三種酪蛋白水解活性和一種氨基肽酶活性，這三種酪蛋白水解酶分別命名為灰色鏈霉菌來源蛋白酶A（Streptomyces griseus Protease A），蛋白酶B（Streptomyces griseus Protease B）和咦酶（Streptomyces griseus Trypsin）。

因此，本制品可用于蛋白的大量或者*降解，還可用來研究蛋白酶抑制劑，以及熱失活動(dòng)力學(xué)。本制品常用于核酸分離步驟，在添加0.2% SDS和10 mM EDTA的體系內(nèi)孵育0.5-3h即可達(dá)到目的。因其比已知的堿性蛋白酶在更高pH環(huán)境下，甚至0.2N NaOH溶液中，活性更強(qiáng)，因此非常適合不溶性蛋白的酶解實(shí)驗(yàn)，以及蛋白結(jié)構(gòu)分析。另，還可與膠原酶和咦酶聯(lián)合使用，以消化組織。也可作用純化糖蛋白生產(chǎn)糖肽。

產(chǎn)品特性

1）   穩(wěn)定性：pH 5.0-9.0范圍內(nèi)高度穩(wěn)定，pH 8.8酶活性zui強(qiáng)；

2）   兼容性：與許多DNA/RNA分離緩沖體系兼容；

3）   特異性：廣譜底物特異性；由多種非特異性內(nèi)/外切蛋白酶組成的混合物，可降解蛋白到單個(gè)氨基酸。

4）   CAS NO：9036-06-0

5）   質(zhì)量控制：約含25%醋酸鈣；

6）   酶活性：≥3.5 units/mg solid

7）   溶解性：在37℃，pH7.5的條件下，溶解于含0.05M 醋酸鈣的0.01M 醋酸鈉溶液，溶解體系添加鈣離子可防止自發(fā)水解。含0.01-0.1M鈣離子的稀釋酶溶液，中性pH條件于2-8℃能穩(wěn)定保存24h以上。

8）   單位定義：在37℃，pH7.5的條件下，每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生的顏色變化等量于1µM酪安酸（181µg）時(shí)需要的酶量，定義為1個(gè)活性單位。（顏色變化通過福林-酚試劑檢測(cè)）

9）   失活方法：80 °C以上加熱15-20min使其*失活。

保存與運(yùn)輸方法

保存：凍干粉4℃穩(wěn)定保存6個(gè)月。-20℃干燥凍存，穩(wěn)定性極其高，至少5年。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

使用方法

【注意】：本品應(yīng)用非常廣泛，具體的使用方法和工作濃度請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)或參考文獻(xiàn)來調(diào)整。

1. 儲(chǔ)存液制備：溶解于去離子水，配制成5-20mg/ml的儲(chǔ)存液，若用于DNA或RNA分離步驟，建議將溶液56℃加熱處理15min，之后37℃孵育1h，此步驟能促使酶發(fā)生自消化，以去除DNase和RNase污染。之后將儲(chǔ)存液分成單次用量，-20℃凍存，通常情況1年穩(wěn)定。

2. DNA分離：直接加入DNA制備體系（含有0.5-1% SDS以打破DNA-蛋白相互作用），典型工作濃度范圍250-500µg 蛋白/ml，于37℃孵育1-4h?！?strong>注意：建議工作濃度范圍在250-2000µg/ml，依照具體情況而定】。

3. 蛋白水解：溶解約0.2µM蛋白到0.2ml 50mM 碳酸氫銨緩沖液，pH 8.0（或磷酸鹽緩沖液，pH 7.0），之后按照1%（w/w）加入Pronase E，于37℃孵育24h。根據(jù)情況，有可能需要添加4%（w/w）氨肽酶M，并于37℃再孵育18h。

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注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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Pronase E 鏈霉蛋白.*酶E 生化試劑

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