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RIPA裂解液的因素

閱讀:413發(fā)布時間:2016-5-16

ELISA試劑盒RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用,RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
RIPA裂解液的原理如下:
RIPA主要是從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA 組織/細胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細胞膜(包括核膜)。
索萊寶RIPA裂解液的使用方法
如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀,請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據(jù)使用量,取每1ml RIPA 加入10ul PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM?;靹騻溆?(PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加)。 
1、樣品前處理: 
a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。
b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。
c)對于組織樣品: 把*切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項 :
強烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同時,也會將基因組一并釋放出來,造成細胞裂解液粘稠,此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液,煮沸再離心,離心后直接上樣電泳;若想測定濃度,可入加少量 SDS(1%),煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的白由于含有去污劑,所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。

BMAL1    芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣1抗體
BRCC3    乳腺癌易感基因復(fù)合物亞基蛋白3抗體
BAMBI    腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白BAMBI抗體
BCL9    B淋巴細胞淋巴瘤因子9抗體
Biliverdin Reductase    膽綠素還原酶抗體
BIVM    BIVM蛋白抗體
Blood Group Lewis a    血型Lewis A抗原抗體
Blood Group Lewis b    粘蛋白/巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶3抗體
BLM    Bloom綜合征相關(guān)蛋白抗體
BMP8b    骨形態(tài)發(fā)生蛋白8b抗體
phospho-BMX (Tyr566)    磷酸化非受體性蛋白*激酶ETK抗體
phospho-BNIP3 (Ser95)    磷酸化促凋亡調(diào)節(jié)蛋白BNIP3抗體
BOB1    B淋巴細胞特異性激活OCT結(jié)合蛋白1抗體
BOP1    核糖體合成蛋白BOP1抗體
BORA    調(diào)節(jié)中心體分離早期相關(guān)激酶BORA抗體

ELISA試劑盒


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