1．粉碎
通常用磨粉機(jī)、糧谷粉碎機(jī)、絞肉機(jī)等將塊狀的或顆粒較大的動(dòng)植物樣本細(xì)化的過(guò)程。目的是增大樣本表面積，有利于待測(cè)組分的提取。
2．提取
ELISA試劑盒提取是使待測(cè)組分與樣品分離的過(guò)程。
提取的方法較多，有靜置法、勻漿法、振蕩提取法、裝置提取法等?，F(xiàn)將常用的提取方法簡(jiǎn)要介紹如下：
(1) 組織搗碎法是食品檢測(cè)中zui常用的一種提取方法，將經(jīng)粉碎的樣品與等量或數(shù)倍于其體積的溶劑混合，通過(guò)高速旋轉(zhuǎn)的葉片(100r／min)將樣本中的待測(cè)組分與溶劑有充分的接觸機(jī)會(huì)，使待測(cè)組分被提取出來(lái)。該方法提取效率高。使用的主要設(shè)備有高速組織搗碎機(jī)、組織勻漿機(jī)、高速均質(zhì)器等。在農(nóng)藥殘留量分析中幾乎都采用組織搗碎法提取，每次提取的時(shí)間約為3～5min，次數(shù)1～2次。在本操作過(guò)程中，需要注意以下事項(xiàng)：試樣和溶劑的總體積不應(yīng)該超過(guò)搗碎缽容積的2／3，以免內(nèi)容物濺出；搗碎機(jī)的旋轉(zhuǎn)速度，一般是先慢后快；整個(gè)操作要在通風(fēng)良好的環(huán)境下進(jìn)行。
(2) 索氏提取法也是食品檢測(cè)中zui常用的提取方法之一。此法通過(guò)裝置——索氏提取器提取待測(cè)組分，提取效率高，操作簡(jiǎn)便，但提取時(shí)間長(zhǎng)。采用索氏提取法時(shí)，應(yīng)充分考慮待測(cè)組分的熱穩(wěn)定性。
(3) 振蕩法在食品檢測(cè)中也較為常用。即將裝有試樣和提取溶劑的具塞容器，放在振蕩機(jī)上，進(jìn)行往返振蕩或旋轉(zhuǎn)振蕩，使容器內(nèi)的提取溶劑與試樣充分接觸，以深入到樣本組織內(nèi)部提取待測(cè)組分。一般情況下，振蕩10-30min，重復(fù)提取2～3次。據(jù)報(bào)道，振蕩法與組織搗碎法和索氏提取法的提取效率相當(dāng)。日本的食品分析方法中幾乎都采用振蕩法。
(4) 超臨界流體萃取儀、強(qiáng)化溶劑萃取儀是近二十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的提取技術(shù)。另外還有一些輔助手段，如超聲波輔助提取、微波輔助提取等。
3．ELISA試劑盒凈化
經(jīng)過(guò)提取的待測(cè)組分，提取物中通常含有與該組分結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)，將待測(cè)組分與雜質(zhì)分離的過(guò)程，稱為凈化。
該步驟是樣本前處理的技術(shù)難點(diǎn)，也是關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性及檢測(cè)方法可靠性的重要步驟。主要方法有固相萃取法、液-液分配法、化學(xué)處理法、掃集共蒸餾法、低溫冷凍凈化法、前置色譜柱凈化法等。
ELISA試劑盒固相萃取法是目前應(yīng)用zui多的凈化方法之一，通過(guò)吸附柱、分配柱、凝膠滲透柱、薄層板等實(shí)現(xiàn)，其原理是樣本的待測(cè)組分在層析柱中吸附劑上被吸附與被解吸的反復(fù)過(guò)程。常用的吸附劑有佛羅里硅土、氧化鋁、活性炭、硅膠、氧化鎂和纖維素等。
液-液分配法也是一種十分常用的凈化方法，其原理是利用待測(cè)組分在一組互不相溶的溶劑對(duì)內(nèi)的分配系數(shù)不同，通過(guò)反復(fù)多次分配，使待測(cè)組分與雜質(zhì)分離，以達(dá)到凈化目的。常用的溶劑對(duì)有乙腈提取液的正已烷分配、乙腈提取液的三氯甲烷分配、丙酮提取液的石油醚分配、丙酮提取液的二氯甲烷分配等。
4．濃縮
ELISA試劑盒由于凈化過(guò)程所引入的溶劑，可能會(huì)降低待測(cè)組分的濃度或不適宜直接進(jìn)樣，需要去除部分或全部溶劑及進(jìn)行溶劑轉(zhuǎn)換，此過(guò)程為濃縮或富集。主要通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干或惰性氣體(如氮?dú)?吹干除去溶劑。
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