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細(xì)胞凍存的方法

閱讀:269發(fā)布時(shí)間:2015-9-23

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。 細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點(diǎn)降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細(xì)胞損傷。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min,當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。

細(xì)胞凍存的方法:
1.細(xì)胞:選對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。 
2.計(jì)數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。 
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。 
4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。 
5.封口:用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱,凍存日期,以便日后查找。 

Phospho-HER4 (Tyr1162) 英文名稱: 磷酸化HER4抗體
Phospho-HER4 (Tyr1188) 英文名稱: 磷酸化HER4抗體
HSD17B3 英文名稱: 羥類固醇脫氫酶17β3抗體
HSD11B1 英文名稱: 羥基類固醇脫氫酶11β1抗體
HSD3B1 英文名稱: 滋養(yǎng)層細(xì)胞抗原3β-HSD抗體
Acetyl-Histone H4(K8) 英文名稱: 乙酰化組蛋白H4抗體
phospho-HMGN1(Ser20+Ser24) 英文名稱: 磷酸化高遷移率核小體結(jié)合蛋白1
HE4 英文名稱: 附睪分泌蛋白4抗體
Histone H3 (Tri Methyl K4) 英文名稱: *基化組蛋白H3抗體
HMGCR 英文名稱: 三羥基*基*還原酶抗體
Heparan Sulfate Proteoglycan 2 英文名稱: 硫酸乙酰肝素蛋白多糖2
HCA2 英文名稱: 肝癌相關(guān)抗原h(huán)ca2
Hexokinase 3 英文名稱: 己糖激酶3抗體


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