(一) 原理
細胞凋亡的發(fā)生，是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180bp～200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法，應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體，與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu)，可特異性檢測細胞溶解物中的核小體片段。
(二)材料與試劑
1.采用Boehringer Mannheim公司試劑盒，生物標記的小鼠抗組蛋白單克隆抗
體。
2.過氧化物酶(-POD)標記的小鼠抗DNA單克隆抗體
3.鏈霉親合素包被的微孔板
4.DNA-組蛋白復(fù)合物，作為陰性對照。
5.ABTS底物
6.溶解緩沖液
7.溫育緩沖液
8.底物緩沖液
(三)樣品
ELISA試劑盒1.培養(yǎng)細胞或離體細胞的裂解物細胞裂解步驟：收集細胞，離心后，用200µl溶細胞緩沖液重新懸浮，室溫下作用30min。
2.培養(yǎng)細胞的上清液
3.血漿(血清)
(四)操作方法
1.取樣品離心后(1 000r/min,10min),吸取20µl上清液，加入鏈霉親合素包被的培養(yǎng)板孔中。
2.另加入80µl免疫反應(yīng)試劑含抗-DNA-POD、抗組蛋白-*及溫育緩沖液(按1︰1︰18混合)，室溫下孵育2h(置搖床上，250r/min)。
3.取上清，用300µl溫育緩沖液洗滌3次，小心移去洗滌液。
4.加入100µl底物緩沖液，室溫下孵育使顏色變化至適合(置搖床上)。
5.盡快作比色分析(10min～20min內(nèi))，用底物緩沖液作空白對照，以波長405nm，參考波長492nm進行檢測。
(五)結(jié)果判定
按下列公式計算細胞釋放的單/低聚核小體片段的特別聚集值：
注：mU=吸收值(10-3)=雙孔吸收值的平均OD值-底物OD值，若樣品的吸收值超過比色測定范圍，應(yīng)適當稀釋后再檢測。
CARM1 蛋白*N甲基4抗體
phospho-CARM1 磷酸化蛋白*N甲基4抗體
phospho-CDK6 磷酸化周期素依賴性激酶6抗體
phospho-CBL2 磷酸化原癌基因CBL2抗體
Cdc7 細胞分裂周期蛋白7抗體
Phospho-cdc2 磷酸化細胞分裂周期蛋白25抗體
Cdc25B 細胞分裂周期蛋白25B抗體
phospho-CD244 磷酸化CD244抗體
CACNG3 神經(jīng)元電壓門控鈣通道γ3/L-type Ca++CP γ3抗體
C3orf25 3號染色體開放閱讀框25抗體
c-Myb 轉(zhuǎn)錄激活因子MYB抗體
CATSPER 陽離子通道精子相關(guān)蛋白1抗體
C1orf222 1號染色體開放閱讀框222抗體
C2orf15 2號染色體開放閱讀框15抗體
ELISA試劑盒
