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技術文章

豬瘟單克隆抗體ELISA操作方法

閱讀:517發(fā)布時間:2015-9-16

一、操作方法

1、用包被液將豬瘟弱毒單抗純化酶聯(lián)抗原、豬瘟強毒單抗純化酶聯(lián)抗原各做100倍稀釋,每孔包被elisa試劑盒100μl,4℃濕盒過夜。

2、次日取出,甩去孔內(nèi)液體,3×3′沖洗。

3、將待檢血清以PBS液做400倍稀釋,每孔加100μl同時將豬瘟陽性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋,于對照孔中加100 μl.37℃溫育1.5h~2h。

4、重復第二步,取出,甩去孔內(nèi)液體,3×3′洗滌。

5、將兔抗豬IgG酶標抗體以PBS液做100倍稀釋,每孔加100μl,37℃溫育1.5h~2h。

6、elisa試劑盒重復第4步。

7、每孔加底物溶液100μl,室溫下觀察顯色反應。當陰性對照孔稍顯色時,立即終止反應,并以陰性孔做空白對照。

8、每孔加終止液50μl立即于酶聯(lián)免疫吸附檢測儀測定490nm波長的光密度。

二、結果判定

在豬瘟弱毒酶聯(lián)板上,OD≥0.2,為豬瘟弱毒抗體陽性;OD<0.2,為豬瘟弱毒抗體陰性。

elisa試劑盒在豬瘟強毒酶聯(lián)板上,OD≥0.5,為豬瘟強毒抗體陽性;OD<0.2,為豬瘟強毒抗體陰性。

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