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技術(shù)文章

ELISA試劑盒操作中的實(shí)驗(yàn)禁忌

閱讀:278發(fā)布時(shí)間:2015-9-30

elisa試劑盒  酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 因其操作簡單,靈敏度高,特異性好,經(jīng)濟(jì)安全等特點(diǎn)而在臨床上廣泛應(yīng)用,但是由于其操作步驟復(fù)雜,一般包括試劑準(zhǔn)備,樣本收集,加樣,溫育,洗滌,顯色,比色,結(jié)果判定等,其中任何一項(xiàng)操作不當(dāng)都會對檢測結(jié)果產(chǎn)生很大影響。因此,必須加強(qiáng)ELISA檢測的全面質(zhì)量控制,保證其結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。Elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響因素包括檢測樣品因素、操作因素等。在實(shí)驗(yàn)操作的過程中有一些技術(shù)要點(diǎn)

1、加樣后及時(shí)放人孵箱,標(biāo)本較多時(shí),要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。

2、實(shí)驗(yàn)時(shí)必須戴手套,穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。

3、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

4、同批號試劑組分不得混用。

5、洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

6、每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時(shí)elisa試劑盒先用此孔調(diào)OD值至零。

7、要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性,可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時(shí),lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進(jìn)行確定。

8、在使用微量加樣器時(shí),吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

9、吸取液體時(shí)速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準(zhǔn)確。

10、手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15~30s,不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。

11、底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃流酸具有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸皮膚。

elisa試劑盒檢測操作步驟復(fù)雜,可能會影響測定結(jié)果的因素較多,分布在測定操作的各個(gè)步驟中,因此必須加強(qiáng)各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制,才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果

ESM1 內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子1抗體
eIF3F 真核翻譯起始因子3F抗體
eIF3H 真核翻譯起始因子3H抗體
eIF4G 真核翻譯起始因子4G抗體
eIF6 β4整合素結(jié)合蛋白抗體
ECRG4 食道癌相關(guān)基因4蛋白抗體
EPO 紅細(xì)胞生成素抗體
EPHX2 胞漿環(huán)氧化物水解酶抗體
Estrogen Related Receptor gamma 雌激素受體相關(guān)蛋白3抗體
Estrogen Related Receptor beta 雌激素相關(guān)受體β抗體
EMP2 上皮細(xì)胞膜蛋白2抗體
ERG25 甲基固醇羥化酶單加氧酶1抗體
EST1A 端粒酶結(jié)合蛋白EST1A抗體
EZH1 組蛋白賴氨酸N-甲基EZH1抗體
Epithelial Stromal Interaction 1 上皮間質(zhì)相互作用蛋白1抗體


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