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技術(shù)文章

通過質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)技術(shù)

閱讀：385發(fā)布時間：2015-7-3

ELISA試劑盒1)肽質(zhì)指紋術(shù)(peptide mass fingerprint, PMF)是由Henzel等人于1993年提出. 用酶(zui常用的是*)對由2-DE分離的蛋白在膠上或在膜上于*或賴氨酸的C-末端處進(jìn)行斷裂，斷裂所產(chǎn)生的的分子量通過質(zhì)譜來測量 (MALDI-TOF-MS，或?yàn)镋SI-MS)，這一技術(shù)能夠完成的肽質(zhì)量可到0.1個分子量單位. 所有的肽質(zhì)量zui后與數(shù)據(jù)庫中理論肽質(zhì)量相配比(理論肽是由實(shí)驗(yàn)所用的酶來“斷裂"蛋白所產(chǎn)生的). 配比的結(jié)果是按照數(shù)據(jù)庫中肽片段與未知蛋白共有的肽片段數(shù)目作一排行榜，“*"肽片段可能代表一個未知蛋白.若冠亞軍之間的肽片段存在較大差異，且這個蛋白可與實(shí)驗(yàn)所示的肽片段覆蓋良好，則說明正確鑒定的可能性較大.
2)ELISA試劑盒肽片段(peptide fragment)的部分測序. 肽質(zhì)指紋術(shù)對其自身而言，不能揭示所衍生的肽片段或蛋白質(zhì). 為進(jìn)一步鑒定蛋白質(zhì)，出現(xiàn)了一系列的質(zhì)譜方法用來描述肽片段. 用酶或化學(xué)方法從N-或C-末端按順序除去氨基酸，形成梯形肽片段(ladder peptide). 首先以一種可控制的化學(xué)模式從N-末端降解，可產(chǎn)生大小不同的一系列的梯形肽片段，所得一定數(shù)目的肽質(zhì)量由MALDI-TOF-MS測量. 另一種方法涉及羧基肽酶的應(yīng)用，ELISA試劑盒從C-末端除去不同數(shù)目的氨基酸形成肽片段.


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